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专题2细胞工程动物细胞工程课题2单克隆抗体等动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。如何进行细胞培养?培养时又需要提供哪些必要条件呢?动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50代细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,增殖能力越强,越容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体细胞增殖缓慢,核型可能变化动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长接触抑制10代以内,保持正常二倍体核型传代培养细胞系5%CO2。维持培养液的pH细胞贴壁表面光滑、无毒,易于贴壁。多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?讨论葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子和动物血清等。适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基类型固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清促生长因子培养结果新的个体或细胞产品细胞或细胞产品培养目的快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物大规模的生产有重要价值的生物制品01病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体为基因工程技术提供受体细胞培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植有毒物质的检测,细胞的生理、药理、病理研究用于筛选抗癌药物等,为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据0602030405动物细胞培养技术的应用动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物)分类胚胎细胞核移植:体细胞核移植:细胞分化程度低,恢复全能性容易细胞分化程度高,恢复全能性不容易动物细胞核移植体细胞核移植的过程:思考:核移植的受体细胞是什么?处在什么时期?通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎?MⅡ中期卵母细胞诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细胞分裂和发育进程。植物、动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞膜的流动性细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理(离心、振荡、电刺激)化学(聚乙二醇)物理、化学方法同左)灭活的病毒用途获得杂种植株物理、化学方法主要用于制备单克隆抗体讨论在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核?为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞,在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前,必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞,想一想,这是为什么?培养的动物细胞一般当传代至10~50代左右时,部分细胞核型可能会发生变化,其细胞遗传物质可能会发生突变,而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此,在体细胞核移植中,为了保证供体细胞正常的遗传基础,通常采用传代10代以内的细胞。你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么?绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体DNA是来自于受体卵母细胞。此外,即便动物的遗传基础完全相同,但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系,核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同,其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同,从这一角度看,克隆动物不会是核供体动物100%的复制。010302体细胞核移植技术的应用前景STEP1STEP2STEP3STEP4在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程保护濒危物种医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植了解胚胎发育和衰老过程;追踪研究疾
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