沙门氏菌和志贺氏菌的检测.ppt

****血清学诊断用已知伤寒、副伤寒的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量试管内凝集试验，称为肥达反应。方法将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作出努力个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原进行试管内凝集，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。第31页,共61页，星期六，2024年，5月1）正常凝集价正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异一般情况下，伤寒沙门菌O抗体的凝集价应在1∶80以上，H抗体凝集价在1∶160以上，引起副伤寒沙门菌H抗体凝集价在1∶80以上才有诊断意义2）动态观察有时单次效价不能定论，可在病程中逐周检查。若效价逐次增加或恢复期效价比初次≥4倍者有意义第32页,共61页，星期六，2024年，5月O与H抗体的诊断意义：O抗体出现较早，为IgM，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。H抗体出现较晚，为IgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。①O、H凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大：②若两者均底，肠热症的可能性小：③若O不高H高，可能是预防接种或非特异性反应；④若O高H不高，则可能为伤寒早期，或与其他沙门菌有交叉反应。第33页,共61页，星期六，2024年，5月结果判断及报告（1）生化试验符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阳性反应，做出检出沙门菌报告。（2）生化试验不符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阴性反应，做出未检出沙门菌报告。（3）生化试验符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阴性反应；或生化试验不符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阳性反应；均应进一步鉴定后再做结论报告。第34页,共61页，星期六，2024年，5月对于疑似菌株或须进一步鉴定的菌株，根据待检菌已测试的特性，可选择增添一些必要的生化试验。糖醇发酵试验明胶液化试验硝酸盐还原试验甲基红试验VP试验柠檬酸盐利用试验半乳糖苷酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验丙二酸钠试验有机酸盐利用试验甘油品红试验第35页,共61页，星期六，2024年，5月注意事项培养基对照挑取菌落纯培养严格按照规定进行避免对环境造成污染第36页,共61页，星期六，2024年，5月志贺菌属检测志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。CDC分类系统（1989）将生化性状相近的A、B、C群归为一群，统称为A、B、C血清群，将鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢-最为常见。细菌性痢疾是一种常见病，主要流行于发展中国家，全世界年病例数超过2亿，其中500万例需住院治疗，年死亡病例达65万。第37页,共61页，星期六，2024年，5月生物学性状——形态结构和染色革兰阴性杆菌，菌体短小，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。。第38页,共61页，星期六，2024年，5月培养特性兼性厌氧、营养要求不高在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落SS平板－－无色菌落Mac平板－－无色菌落EMB平板－－无色菌落宋内志贺菌多呈扁平、R型菌落，个别菌株可迟分解乳糖第39页,共61页，星期六，2024年，5月生化反应氧化酶试验（－）分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖）KIA：KA－－MIU：－＋/－－IMViC：－/＋＋－－除A群外，均能发酵甘露醇第40页,共61页，星期六，2024年，5月抗原结构只有O、K抗原，无H抗原K抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集根据O抗原分4群和44型第41页,共61页，星期六，2024年，5月志贺菌抗原分类第42页,共61页，星期六，2024年，5月抵抗力对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感对消毒剂敏感易产生耐药性第43页,共61页，星期六，2024年，5月变异性S-R变异宋内志贺的菌落由光滑型变为粗糙型为S-R变异,此外尚伴有生化特征、抗原构造及致病性的变异，而出现不典型菌株。耐药性变异志贺菌于50年代首先出现对磺胺的耐药性，后发展成多重耐药性，在70年代和80年代分别出现对四环素和氨苄青霉素的耐药性，最近又出现对SMZ-TMP的耐药性。志贺菌的多重耐药性的问题已成为一个严重的医学问题第44页,共61页，星期六，2024年，5月