流式细胞术临床检测项目操作流程.pdfVIP

博观而约取，厚积而薄发。——苏轼

临床检测项目操作流程

1：淋巴细胞亚群测定

2：HLA-B27测定

3：CD55／CD59测定

4：血小板抗体测定

5：红细胞抗体测定

6：粒细胞抗体测定

7：白血病免疫分型测定

8：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定

9：XL操作步骤

淋巴细胞亚群测定

(CD系列)

方法

流式细胞仪(BD)

原理：

双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上

相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得

+

到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3；B淋巴细胞：

++++++

CD5，CDl9；辅助性T淋巴细胞：CD3CD4；抑制性T淋巴细胞：CD3CD8；NK细胞：

-++

CD3CDl656等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞

及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。

标本采集与处理

受检者的准备：检查对象生活饮食处于日常状态，空腹静脉采血。

抗凝剂：EDTA或肝素抗凝血

要求：1．样本量至少1ml。

．样本应在采2集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。

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．样本白细胞计数应在34.0-10.010×/L之间。若10.0×10/L，样本需要稀释，用PBS

博观而约取，厚积而薄发。——苏轼

稀释；若4.0×109/L，应分离单个核细胞。

．溶血样本不能用。4

试剂

品牌规格贮存

贝克曼库尔特

成分1：单克隆抗体1ML2—8℃

2：全血溶血试剂

A：甲酸70ML室温

B：碳酸钠等32ML室温

C：多聚甲醛14ML室温

：鞘液320L室温

：清洗液45L室温

：荧光微球510ML2-8℃

质控品BD产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8℃

可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。

样本制备：

1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20ul单克隆抗体和同型对照

2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。

3)混匀，避光，室温孵育20-30分