临床基因扩增检验的质量保证.pptVIP

质控图的记录的其它方面IQC数据是用来控制实际过程的，因此其表达应清楚和直接，在质控图上记录结果时，应同时记录测定的详细情况，如日期、试剂、质控物批号和含量及测定者姓名等。Levey-Jennings质控图方法的特点优点是简单明了；缺点：以±2s为失控限，假失控的概率太高，通常不能接受；以±3s为失控限，假失控的概率低，但误差检出能力不强。0102Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法Westgard多规则质控方法即是将前述的多个质控规则同时应用进行质控判断的方法。最初常用的有六个质控规则，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S规则作为告警规则，当出现质控测定值违反12S规则时，则起动其它规则进行判断。只有当使用所有质控规则判断确定某测定批在控时才说明该测定批在控，只要上述质控规则之一判断测定批失控则即认为该测定批失控。通常上述规则中，13S和R4S规则反映的是随机误差，而22S、41S和10X反映的是系统误差，系统误差超出一定的程度，也可从13S和R4S规则反映出来。扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法第二种方法并非直接测定孔内温度，而是通过扩增功能来间接获知孔间的均一性，即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果的一致性程度，如果有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热传导有损坏。试剂盒的质检定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根(SD)=上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c等（例如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增和产物检测等）的标准差；0102理想的试剂和操作方法理想的试剂和操作方法改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，应对试剂准备、标本收集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序”(SOP)人员培训临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，这其中所涉及的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，但由于均为微量操作，要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验，要尽可能做到知其然又知其所以然。核酸样本的制备、扩增检测01及其质量控制02一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理03核酸的分离纯化04靶核酸提取的质量05临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质06核酸样本制备及扩增检测的质控07产物检测的质控08一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理01靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。02核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。01经典方法02硅吸附法03对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。04核酸的分离纯化纯化的靶核酸的完整性：可使用凝胶电泳将样本的核酸提取物与一核酸标准比较测定。核酸提取的产率：可在A260读数测定。核酸纯度：可通过提取物A260/A280比率判定血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：采用一种间接的方法，即使用已知病原体含量的溶血和/或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，比较所得到的结果3214靶核酸提取的质量临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质临床标本中：血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：许多试剂如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢剂如十二烷基硫酸盐(SDS)和chaotrope试剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有机溶剂。核酸样本制备及扩增检测的质控对临床标本中可能存在的抑制/干扰物的质控措施核酸提取及扩增有效性的质控内标设置的必要性？内标有两种,即竞争性的和非竞争性的内标。质控措施：采用内质控（internalcontrol,IC）（通常称为内标）的方法抑制/干扰物的质控措施对临床标本中可能存在的已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，其最后的检测结果，应是核酸提取和扩增检测的有效性的综合反映。已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，扩增测定的结果可以判断核酸提取过程中是否发生污染。核酸提取及扩增有效性的质