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多克隆抗体技术及其制备技术

1.多克隆抗体的概念

抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异

性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免

疫球蛋白就是抗体。

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B

淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Moncloneantibody）。由多种

抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂

在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的

多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD

等五类抗体。

2.免疫动物

供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和

豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。

如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采

用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难

以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的

抗体，多用兔和羊制备。

免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制

备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。由于对免疫应答的个别差异，免

疫时应同时选用数只动物进行免疫。

抗原是多种多样的，而且千差万别。就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、

多糖类抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。为了获得较

好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA文库或

免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。不同的抗原，其免疫原性的强

弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、

物理形状和弥散速度等。

抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不

同而不同。剂量过低，不能引起足够强的免疫刺激，免疫剂量过多，有可能引起免

疫耐受。在一定的范围内，抗体的效价是随注射剂量的增加而增高。蛋白质抗原的

免疫剂量比多糖类抗原宽。一般而言，小鼠的首次免疫剂量为50μg～400μg/次，大

鼠为100μg～1000μg／次，兔为200μg～1000μg/次。加强计量为首次剂量的1／5～

2／5。

免疫剂量与注射途径有关，一般而言，静脉注射剂量大于皮下注射，而皮下注

射又比掌内和跖内皮下注射剂量大，也可采用淋巴结内注射法。加佐剂比不加佐剂

的注射剂量要小，对家兔而言，采用弗氏完全佐剂，则需注射0.5mg～1mg/kg.次，

如采用弗氏不完全佐剂则注射剂量应大10倍以上。如要制备高度特异性的抗血清，

可选用低剂量抗原短程免疫法。如需要获得高效价的抗血清，宜采用大剂量长程免

疫法。免疫周期长者，可少量多次。免疫周期短者，应大量少次。

两次注射的间隔时间应长短适宜，太短起不到再次反应的效果，太长则失去了前一

次激发的敏感作用。一般间隔时间应为5~7天，加佐剂者应为2周左右。

注射的Ig纯度高，则一般不易引起过敏反应，如注射血清，即使是少量，在再

次免疫时，极易引起过敏反应，所以一定要采取措施。

3.佐剂的应用

对可溶性抗原而言，为了增强其免疫原性或改变免疫反应的类型、节约抗原等目的，

常采用加佐剂的方法以刺激机体产生较强的免疫应答。

1．佐剂的类型目前实践中常应用的佐剂有氢氧化铝胶、明矾、弗氏佐剂、脂质体

和石蜡油等。也有采用结合杆菌等分枝杆菌、白喉杆菌以及细小棒状杆菌等。

⑴弗氏不完全佐剂（incompleteFreundsadjuvant,IFA）

羊毛脂1份

石蜡油5份

混合，高压灭菌后保存。用时加热融化，冷却至50℃左右，加抗原进行乳化处理。

⑵弗氏完全佐剂（completeFreundsadjuvant,CFA）

弗氏不完全佐剂10ml

卡介苗10mg～200mg

卡介苗可100℃10min灭活处理。

初次免疫时，最好用弗氏完全佐剂，以刺激机体产生较强的免疫反应。再次免疫时，

一般不用完全佐剂，而采用弗氏不完全佐剂。但在研究分枝杆菌及相关抗原时，一

般不用弗氏完全佐剂，以免卡介苗的干扰。

⑶脂质体：是人工制备的类脂质的小球体，