生物制药技术2-基因构建ppt课件.pptxVIP

生物制药技术;《生物制药技术（含实验）》课程教学大纲;生物制药研发的基本流程;2.1基因与工程细胞构建

2.2工程细胞的发酵培养与蛋白表达

2.3重组蛋白的分离纯化

2.4生物制药的制剂研究

2.5生物制药的质量研究与分析技术

2.6生物制药的中试研究

2.7生物制药的稳定性研究;2.1.1基本概念

2.1.2质粒、载体

2.1.3工程细胞与细胞库

2.1.4表达方式选择

2.1.5基因构建与诱导表达

2.1.6实例;2.1基因与工程细胞构建;2.1.2质粒、载体;2.1基因与工程细胞构建;2.1基因与工程细胞构建;克隆;原始种子库;调控;蛋白质结构;依赖于制备过程的蛋白质结构;;2.1基因与工程细胞构建;;优点突出

正确指导蛋白质正确折叠

提供糖基化等多种翻译后加工

在新基因发现、蛋白质结构功能研究中起极为重要的作用

生产阶段系统表达水平达到7g/L

生物医药产业发达国家新药研发中均选择哺乳动物细胞表达系统;正常细胞生长特性

锚地依赖性

血清依赖性

接触抑制性

形态依赖性

体外培养正常细胞改变某些特征，越过生理临界点，继续无限制分裂——细胞系形成;哺乳动物细胞表达系统;遗传标记;常用宿主细胞商业化

CHO——中国仓鼠卵巢细胞系

BHK——小仓鼠肾细胞系

COS——非洲绿猴肾成纤维细胞系

NSO——小鼠骨髓瘤细胞系

SP2/0——小鼠骨髓瘤细胞系

HEK293——人胚肾细胞系

NIH313——鼠成纤维细胞系

因稳定性与糖基化不同，根据表达目的蛋白选择适当细胞系;真核表达载体必要原件

高活性启动子、转录终止序列、有效mRNA翻译信号

复制子、抗生素抗性基因、限制性酶切位点

标志基因

内含子

内部核糖体进入位点（IRES）;诱导的方式

IPTG/乳糖

低温

pH

低磷;高效表达外源蛋白的基本原理

通过强化基因扩增高效表达外源基因

DHFR-MTX高效表达系统;组织纤溶酶原激活剂;组织纤溶酶原激活剂;;;2.1基因与工程细胞构建;载体：pET-44a

宿主菌：BL21;思考题;编号