生物样品内中药制剂化学成分分析.ppt

第四节生物样品内药物分析方法（一）专属性1、目的：证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。2、方法：色谱法至少要考察6个不同个体空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图。第64页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（二）标准曲线与定量范围方法：将药物对照品（实为对照品溶液）加入与供测样品相同的空白生物基质中混匀，配成已知药浓的标准品样品，然后按照样品预处理的方法进行处理后测定，将响应值与药浓建立标准曲线使标准样品与供测样品均处于相同的生物基质环境中，按相同方法平行处理和测定，将所有样品中的药物及标准曲线各浓度标准样品中的药物均按相同比例表现为响应值第65页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（二）标准曲线与定量范围注意：1.标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。2.用至少5个浓度建立标准曲线，定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。3.建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。第66页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（三）准确度方法：将已知量的药物纯品加到空白样品中经过一系列的处理、测定，所得药物量与加入量之比值得百分率即为回收率注意：每次测定所得回收率要保持恒定、重现性好分类：绝对回收率和方法回收率第67页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法1.绝对回收率：又称萃取回收率、提取回收率,反映一个方法的萃取效率高、中、低三种浓度吹干吹干甲乙+空白体液+混匀+有机溶剂萃取取萃取液，吹干+有机溶剂溶解+有机溶剂溶解分析分析结果比较第68页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法1.绝对回收率：高、中、低浓度的选择：低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。相对标准差一般应小于15%，在定量下限附近相对标准差应小于20%。绝对回收率数据要求：≥50％第69页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法2.方法回收率：又称为相对回收率加样回收实验法R＝(M-P)/A×100％85％~115%(样品药浓≥200μg/L)80％~120％（样品药浓＜200μg/L）考察加入药物量在真实样品中的回收率，因此加入药物量应有高、中、低三种，而含药物的真实样品则可仅使用一种浓度，应将该浓度样品事先测定3~5次后取均值，作为原药量p，然后加入高、中、低不同量的药物标准品溶液。第70页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（三）准确度绝对回收率和方法回收率的区别：方法回收率：表示分析方法的准确度，加样回收实验萃取回收率：指经预处理后能将生物样品中的药物用于分析的比例第71页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（四）精密度1、方法：要求选择3个浓度的质控样品（含药物的真实样品）同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。2、内容：日内精密度和日间精密度第72页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法2.1日内精密度：考察分析方法在短期内的变异情况2.2日间精密度：考察样品测定时使用的标准曲线、仪器性能、试剂来源，以及环境条件等都可能有微小变化，从而导致分析结果的变异程度。第73页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法2.3进行日间精密度的方法：可使用日内精密度测定时使用的三种药浓样品，在一周内不同日分别测定3~5次，计算RSD。3.精密度数据要求：一般可控制在RSD≤15％第74页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（五）定量限定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能满足测定3~5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10~1/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%~120%范围内，RSD应小于20%。应由至少5个标准样品测试结果证明。第75页,共89页，星期六，2024年，5月第四节生物样品内药物分析方法（六）稳定性