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PCR法检测HBV

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摘要：目的了解乙型肝炎病毒的相关知识及PCR技术在乙型肝炎病毒检测方面的应用，

并通过实验的方法加深理解。方法将已导入乙肝病毒特定段基因的质粒用基因扩增仪进行

扩增，然后分两组进行电泳，并设置阴性对照、阳性对照、空白对照和Marker对照组。电

泳完毕后将胶板放在UVP凝胶成像系统下观察，对照。结果实验组1弱阳性，实验组2

阴性。讨论分析了实验结果及误差产生的可能原因。

关键词：HBVPCR琼脂糖凝胶电泳

一、引言

1.现状

乙型肝炎病毒感染是一个全球性的公共卫生问题。据估计，全

世界大约有20亿人是过去或现在的HBV感染者以及超过350万人长

期感染乙肝病毒。在受感染的青少年或成人中，5％-10％将发

展成慢性携带者，而在受感染的新生儿达90％慢性化发展。在慢性

HBV感染者中，70％-80％可以持续正常多年或终身。进一步持

续病毒感染，可以导致慢性活动性肝炎，甚至可能发展至肝硬化和

[1]

肝癌。在我国，乙肝病毒携带者约有1.2亿人。

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2.HBV的形态与结构[2]

感染者血清中用电镜观察可见三种不同形态的HBV颗粒，即大

球形颗粒、小球形颗粒和管形颗粒。

大球形颗粒亦称Dane颗粒，是具有感染型的完整成熟的HBV，

呈球形。病毒外层有7nm厚的包膜，内层为病毒核心（核衣壳）结

构，成二十面体立体对称。HBV核心内部含有双股不完全环状的DNA

基因组和DNA多聚酶。小球形颗粒，主要为HbsAg，不含HBVDNA

和DNA多聚酶，无感染性。管形颗粒，是由小球形颗粒“串联”而

成，不含病毒核酸，无传染性。

3.HBV基因结构及抗原组成[3]

HBV-DNA分为负链(长链)及正链(短链)，其中负链有4个开放

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阅读框架，分别称为S、C、P和X基因区，他们彼此间相互重叠，

以不同的启动子编码多种蛋白。

⑴S基因区：S区基因有3个不同的启动子，分别形成S基因、PreS1

基因与PreS2基因，分别编码HbsAg、PreS1Ag和PreS2Ag三种包膜

蛋白多肽；

⑵C基因区：由前C基因和C基因组成,分别编码HBeAg及HBcAg；

⑶P基因区：P区基因最长，编码HBV-DNA多聚酶、反转录酶及RNA

酶H（RnaseH）等；

⑷X基因区：X区基因编码的蛋白称为HbxAg，可反式激活HBV的

基因，增强HBV基因的复制和表达。

4.HBV的检测

近二十年以来，人们在乙肝诊断方法方面做了大量的研究工作。

早期阶段主要应用生化检查方法即肝功能检查，还有免疫学方法，

主要采用血清学方法检测血清HBV抗原、抗体，检测HBVDNA多聚

酶等。近来随着分子生物学的快速发展，分子生物学技术检测血清

HBVDNA（HBV感染的直接标志）的方法开始被应用于乙肝的诊断，

并且不断发展完善。

聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是80年代中

期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快

速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所

要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万

倍。将PCR技术和琼脂糖凝胶电泳结合，可用于HBVDNA的检测，

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并且具有以上优点。[4]

二、实验材料和主要实验仪器

1.模板：重组质粒（将