组织工程医疗产品 评价基质及支架免疫反应的试验方法：淋巴细胞增殖试验编制说明.pdf

《组织工程医疗产品评价基质及支架免疫反应的

试验方法：淋巴细胞增殖试验》（征求意见稿）

编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

根据国家药监局综合司《关于印发2021年医疗器械行业标准制

修订计划项目的通知》(药监综械注〔2021〕69号，械注〔2021〕230

号)的有关规定和要求，标准计划项目《组织工程医疗产品评价基质

及支架免疫反应的试验方法：淋巴细胞增殖试验》（项目编号：

N2021005-T-zjy）由全国外科植入物和矫形器械标准化技术委员会组

织工程医疗器械产品分技术委员会归口，标准起草单位为中国食品药

品检定研究院、北京市医疗器械检验所。

（二）工作过程

本标准的编制工作从2020年8月开始，经标准复审后，在原标准

（YY/T0606.15-2014组织工程医疗产品第15部分：评价基质及支

架免疫反应的试验方法：淋巴细胞增殖试验）的基础上对部分技术内

容提出修订计划，并获得2021年行业标准立项。2021年3月，秘书处

组织召开标准修订工作启动会（网络会），标准起草小组成员逐条讨

论修订内容，形成了标准草案（工作组讨论稿），确定了验证方案，

并初步确定标准完成修订的整体工作进度安排。2021年4～7月，起草

小组对主要修订技术内容开展验证工作。2021年7月起草小组根据部

分修订技术内容的验证结果，进一步修改和完善标准草案，形成了征

求意见稿，于2021年8月9日开始向全体委员和全社会进行广泛征求意

见，同时向相关监管部门（国家药品监督管理局医疗器械注册司和监

管司、医疗器械技术审评中心、食品药品审核查验中心、药品评价中

心）定向征求意见。截止时间为2021年10月8日。

二、标准修订主要依据

（一）本标准编制原则

本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标

准化文件的结构和起草规则》的规定起草。坚持适用性和有效性为准

则，并结合当前行业发展现状与特点，提高标准贯彻实施的实用性和

可操作性。

（二）本标准修订的主要依据

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原标准YY/T0606.15-2014中制定的采用H-胸腺嘧啶核苷、MTT

进行的淋巴细胞增殖试验受限于放射性试验条件的限制，或试验终点

时不能获取活细胞，无法进一步对其免疫效应进行分析，不能获得受

试物引起的特异性增殖的淋巴细胞亚群等信息，因此对该标准进行修

订。标准修订的主要技术内容简介如下：

——在“5.3.2体内抗原刺激方式”亚条款增加注释，“对于可

降解组织工程支架材料，宜考虑在不同的降解时间点获取动物标本进

行淋巴细胞增殖试验。对于表现出影响淋巴细胞增殖的试验材料，宜

考虑其效应的剂量关系，例如进行体内多剂量组试验材料的淋巴细胞

增殖试验”。

——在“推荐操作步骤5.4.5”亚条款中，增加CCK-8、CFSE作

为淋巴细胞增殖检测方式。

——在“6数据分析”条款中，增加“CCK-8检测的光密度值，

CFSE检测的细胞分裂比率、细胞增殖比率、细胞增殖指数和细胞分

裂指数”作为分析指标。

——增加资料性附录A“CFSE淋巴细胞增殖试验”（见附件）

其他编辑性修改详见标准草案。

三.主要试验验证情况

（一）体外抗原刺激淋巴细胞增殖试验

分离获取Balb/C小鼠脾细胞，用含0.1%BSA的PBS重悬调整细

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胞浓度为2×10/mL。细胞悬液分为两份，一份作为无CFSE染色的细

胞，直接离心沉淀后用含10%FBS的培养液重悬并调整细胞浓度为2

×10/mL后接种24孔板，每孔1mL，分组设置为细胞对照组、阳性6

对照组（ConA）、试验材料浸提液组。另一份细胞悬液加入CFSE（最

终浓度为2μM）室温避光染色7min，加入含10%FBS的预冷培养

液终止染色后离心洗涤2次。用含10%FBS的培养液重悬并调整细胞

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浓度为2×10/mL后加入24孔板，每孔1mL，分组设置同前。

然后CFSE标记和无CFSE标记的细胞对照组、阳性对照组和试

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