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DNA纯化——PCR产物纯化

一、产物直接纯化

PCR扩增完成后需要进行琼脂糖凝胶电泳检测，在条带单一无其

他杂带的情况下，可以直接对产物进行纯化，常见的纯化方法有：

1、硅胶层析柱法

原理：大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜，实际上就是一

层玻璃纤维，其表面有大量修饰的硅羟基（Si-OH），硅羟基在溶液

中解离后带负电，然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥，从而

吸附住DNA，使得DNA双链变单链，不会被生物大分子溶剂洗脱，

但能经水溶性缓冲液水化后，被定量回收，从而实现纯化分离。

图1硅胶层析原理示意图

图2硅胶层析流程简图

2、磁珠法（abs60151）

原理：磁珠是有磁性的能吸附DNA的物质，其内部核心是铁离子，

在磁场作用下可以吸附在磁体上。在核心外，经过羧化，带有羧基基

团，在特定的离子条件下，可以与DNA结合。结合后，在外磁场的作

用下，磁珠与DNA结合体移动到磁体周围，可以很方便去除其他多余

的液体，这时，不能与磁珠结合的所有杂质都随水溶液一并去除。然

后，在洗脱条件下，DNA与磁珠分离，溶解在水中，将溶解有DNA

的溶液转移，就得到了纯化后的DNA样本。

图3磁珠法结构示意图

图4磁珠法纯化DNA流程简图

3、其他纯化方法

①渗透液结合醇沉纯化

原理：利用分子大小不同，小分子的物质能够通过渗透膜溶解到

大量的溶液中去，而大分子的物质不能通过渗透膜，所以继续留存在

透析袋中，通过乙醇沉淀最后达到去除小分子物质，得到纯化的有机

大分子的效果。

②直接沉淀纯化

原理：DNA分子在高盐离子醇溶液中会被沉淀出来，而其他物质

继续溶液在溶液中，沉淀出来的DNA分子经过离心与溶液成分分开，

达到纯化的目的。

不同纯化方法对比

渗透液纯沉淀纯

纯化方法硅胶层析柱法磁珠法

化化

乙醇/

纯化介质硅胶膜磁珠渗透膜

异丙醇

操作简便、快速、安产物纯度高；通量高，可

样本处理体积灵活，

优势全，产物纯度高随时用实现自动化；操作简便、

产量高，成本低

于下游实验快速、安全；高灵敏度

存在堵柱风险；对样本

需要搭配磁力架或者仪器

起始量有限制；难以实

使用，成本较高；部分安全性低，无法进行

现自动化操作，大批量

劣势DNA难以被抓取导致回收高通量提取、纯度较

处理费时费力；小于

率低；小于100bp的DNA低

100bp的DNA片段难以吸