生物制品的制备.ppt

2、纯度分析（analysisofpurity）它包括目的蛋白质含量测定和杂质限量分析两个方面的内容。（1）目的蛋白质含量测定通常采用的方法有还原性及非还原性SDS、等电点聚焦、各种HPLC、毛细管电泳（CE）等。（2）杂质①蛋白类杂质②非蛋白类杂质：主要有病毒和细菌等微生物、热原质、内毒素、致敏原及DNA。第147页,共152页，星期六，2024年，5月3、生物活性测定（measurementofbio-activity）是保证基因工程药物产品有效性的重要手段，需要进行动物体内试验和通过细胞培养进行体外效价测定。重组蛋白质是一种抗原，可用放射免疫分析法或酶标法测定其免疫学活性。体内生物活性的测定要建立适合的生物学模型。体外生物活性测定的方法有细胞培养计数法、3H-TαR掺入法和酶法细胞计数等。第148页,共152页，星期六，2024年，5月4、稳定性检测（examinationofstability）稳定性检测是评价药品有效性和安全性的重要指标之一。5、产品一致性的保证（secureofproductionconsistency）第149页,共152页，星期六，2024年，5月五、产品的保存（conservationofproduction）1、液态保存（conservationofliquid）（1）低温保存：液态蛋白质样品在-10～-20℃以下冰冻保存比较理想。（2）在稳定pH条件下保存：蛋白质较稳定的pH一般在等电点，因而保存液态蛋白质样品时，调到其稳定的pH范围内。第150页,共152页，星期六，2024年，5月（3）高浓度保存：一般蛋白质在高浓度溶液中比较稳定，这是因为液态蛋白质容易受水化作用的影响，保存时浓度不能太低，否则可能引起亚基解离和表面变性。（4）加保护剂保存：加入某些稳定剂可以降低蛋白质溶液的极性，以免变性失活。第151页,共152页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第152页,共152页，星期六，2024年，5月3）亲和层析的基本原理（MechanismofAffinityChromatography）①亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂。②当含有混合组份的样品（流动相）通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，其它没有亲和力的无关组份就随流动相流出。③然后改变流动相成份，将结合的亲和物洗脱下来。（见Fig1、Fig2）。第115页,共152页，星期六，2024年，5月（Fig1.MechanismofAC）第116页,共152页，星期六，2024年，5月（Fig2.MechanismofAC）第117页,共152页，星期六，2024年，5月具有特异性亲和作用的生物分子4）配基的种类(sortsofligand)抗原与抗体。DNA与互补DNA或RNA（cDNA、mRNA)。酶与其底物。激素与其受体。维生素与结合蛋白。糖蛋白与植物凝集素。第118页,共152页，星期六，2024年，5月5）亲和层析载体的性质与选择亲和层析载体的选择（selectionofvectors）多孔的立体网状结构，能使被亲和吸附的大分子自由通过。颗粒均匀，具有良好的流速。具有惰性，尽量减少非专一性吸附。在温和的条件下能与配基共价偶联。第119页,共152页，星期六，2024年，5月6）常用的亲和层析载体（VectorsofAffinityChromatography）纤维素（cellulose）葡聚糖凝胶（Sephadex）琼脂糖凝胶（Sepharose）聚丙烯酰胺凝胶（Bio-gel）多孔玻璃珠（Bio-Glass）其它新型载体（Othergels）第120页,共152页，星期六，2024年，5月7）亲和层析配基的选择（Selectionofligand）1.纯化对象和配基之间必须有较强的亲和力。2.但亲和力太高也是有害的，因为在解离配基复合物时所需的条件就要强烈，这样可能使生物分子变性。3.配基必须具有适当的化学基团，可用于和载体相连，同时又不影响配基与生物分子之间的亲和力。第121页,共152页，星期六，2024年，5月8）载体、配基、目的物的连接

（Conjunctionofvector、ligandandtargetmaterial）载体（VectorsorMatrix）+配基（Ligand）+目的物（targetmaterial