一般生殖毒性试验方法原则.ppt

致畸作用机理*Wilsom(1977)提出了畸形发生的9种机制，包括01突变、染色体断裂、有丝分裂改变、改变核酸完整性或功02能、减少前体或底物的补给、减少能源支持、改变膜特性、03渗透压不平衡和酶抑制作用。近年来在分子水平的研究有04很大的进展，虽然胚胎有代偿机制弥补外源性化学物的影05响，但是，是否产生畸形依赖于在致病过程中的每个步骤06在损伤和修复之间的平衡。0701020304对致畸的易感性取决于孕体的基因型及其与有害环境因子相互作用的方式。致畸物以特异的方式（作用机制）作用于发育的细胞和组织，启动一系列的异常发育事件（细胞病理机制）。05异常发育的四种表型是：死亡、畸形、生长迟缓和功能缺陷。对致畸的易感性随着对有害因素暴露的发育时期的不同而变化。有害影响能否接近发育中的组织取决于有害影响本身的性质。随着剂量的增加，异常发育表型的频率和程度也随之增加，从无毒作用到全部致死。06Wilson发育毒理学基本原理致畸作用机制*2细胞死亡和增致速度减慢3细胞间通讯抑制1基因突变引起胚胎发育异常5胚胎组织发育过程的不协调4胚胎中间代谢障碍外源化学物发育毒性的评价*传统常规致畸试验主要试验方案：由美国环境保护局（EPA）首先提出。1.三段生殖毒性试验主要用于评价药物的生殖发育毒性。2.一代和多代生殖毒性试验主要用于评价食品添加剂、农药及其他化学物的生殖发育毒性。3.改进的大鼠发育神经毒性的试验程序。动物选择:*致畸试验的动物选择，除参照毒性试验中选择动物的一般原则，即食性和对受试物代谢过程与人类接近，体型小，驯服，容易饲养和繁殖及价廉外，还应特别注意妊娠过程较短、每窝产仔数较多和胎盘构造及厚度与人类接近等特点。通常采用两种动物：一种啮齿类，首选大鼠；另一种非啮齿类推荐家兔。剂量分组：*一般应先进行预试，目的是找出引起母体中毒的剂量。最少设3个剂量组，另设对照组。原则上最高剂量组，可以引起母体轻度中毒，即进食量减少、体重减轻、死亡不超过10%。最低剂量组为无母体和胚胎毒性反应；中间剂量组可以允许母体出现某些极轻微中毒症状。其剂量与高剂量和低剂量成等比级数关系。一般最高剂量不超过LD50的1/5～1/3，低剂量可为1／100～1／30。第八讲生殖发育毒性及其试验与评价方法*第一节概述哺乳动物的生育繁殖过程外源化学物对生殖发育的影响外源化学物对生殖发育损害作用的特点哺乳动物的生育繁殖过程*生殖发育是哺乳动物繁衍种族的生理过程，其中包含生殖细胞发生（即精子发生和卵细胞发生）、配子的释放、性周期和性行为、卵细胞受精、受精卵的卵裂、胚泡的形成、植入或着床、胚胎形成、胚胎发育、器官发生（或称器官形成）、胎仔发育、分娩和哺乳过程。01生殖发育也可称繁殖过程。02连续、完整的生殖发育过程的六个阶段*从硬腭闭合到妊娠结束：检查成年雌性生殖功能、胎体的发育与生长、器官的发育与生长。从交配前到受孕：检查成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育与成熟、交配行为、受精。从着床到硬腭闭合：检查成年雌性生殖功能、肧体发育、主要器官形成。从受孕到着床：检查成年雌性生殖功能、胚胎着床前发育、着床。从断乳到性成熟：检查断乳后的发育与生长、对独立生活的适应、达到完全的性功能。从出生到断乳：检查成年雌性生殖功能、新生仔对宫外生活的适应性、断乳前的发育与生长。外源化学物对生殖发育的影响*干扰生殖发育的任何环节，并造成损害作用。可以通过对内分泌系统，特别是对性腺的作用，发生间接的影响。神经系统对内分泌功能也有调节作用，通过下丘脑-垂体-睾丸轴(下丘脑-垂体-卵巢轴)两条途径作用于生殖发育过程。外源化学物对生殖发育损害作用的特点生殖发育过程较机体其他系统更为敏感；外源化学物对生殖发育过程影响的范围较为广泛和深远。不仅直接涉及雌雄两性个体，同时还对其第二代甚至以后世代的个体产生影响。*第二节生殖毒性及其评价生殖毒性的表现生殖毒性的评价方法1950年美国霍普金斯大学医院发现，怀孕期间服用黄体酮，先后有600多名女婴出现生殖器男性化畸形。1956年用于治疗妊娠反应的反应停，1961年后出现近万例短肢畸形儿(海豹畸形)。二恶英(TCDD)造成的大面积污染及其与人群生殖危害的关系至今仍不清楚。过去半个世纪震惊全球的系列中毒或灾难事件的发生，在世界范围内提高了人们对用药的安全意识，高度关注新的化学物对生殖内分泌系统或妊娠结局的不良影响，促进了与生殖内分泌系统安全相关法律的产生和研究方法指南的问世。一、生殖毒性表现*外源化学物对生殖的过程的损