LS-45／55 荧光／磷光／发光分光光度计使用说明书.pdfVIP

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

ＬＳ－４５／５５荧光／磷光／发光

分光光度计

使用说明书

美国PerkinElmer公司

王国强黄建权编译

２００２年４月

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

一、理论基础

荧光、磷光、化学发光及生物发光均属于分子发光。现将其原理简介如下：

室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基态的分子吸收能量后被激发为激

发态。激发态不稳定，将很快衰变到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象被

称为“发光”。

每个分子具有一系列严格分立的能级，称为电子能级，而每个电子能级中又包含了一系

列的振动能层和转动能层。图中基态用Ｓ表示，第一电子激发单重态和第二电子激发单重

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态分别用ＳＳ表示，０、１、２、３…表示基态和激发态的振动能层（见图１），第一、

１、２

二电子的激发三重态分别用Ｔ和Ｔ表示（见图２）。

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图１荧光的能级图

１、荧光的产生

－９

当分子处于单重激发态的最低振动能级时，去活化过程的一种形式是以１０～１

－６

０秒左右的短时间内发射一个光子返回基态，这一过程称为荧光发射（见图１）。

２、磷光的产生

从单重态回到三重态的分子系间跨越越迁发生后，接着发生快速的振动驰豫而到达

－４２

三重态的最低振动能层上，当没有其他过程同它竞争时，在１０～１０秒左右的时

间内跃迁回基态而发生磷光（见图２）。

由此可见，荧光与磷光的的根本区别是：荧光是由激发单重态最低振动能层至基态

各振动能层的跃迁产生的，而磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间

跃迁产生的。

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

图２磷光的能级图

３、化学发光及生物发光的产生

某些物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发

至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出了一定波长的光，这种吸收化学能使

分子发光的过程称为化学发光。化学发光也发生于生命体系，这种发光被称为生物发光。

二、仪器简介

１、仪器原理

图３ＬＳ４５／５５荧光／磷光／发光分光光度计的原理图

学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。——黄睎

用于测量荧光／磷光／发光的ＬＳ４５／５５是由图３所示的五个主要部件组成的：光

源、激发光单色器、样品池、发光单色器及检测器。

由光源发出的光经激发光单色器得到所需要的激发光波长。如其强度为Ｉ，通过样品

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