高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修1.docVIP

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大肠杆菌的培育和分别

1．微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？

(1)概念内涵：其关系图解见下

(2)结构上：三者都是结构简洁，形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的，详细如下：

2．培育大肠杆菌的LB培育基中有各种物质，为什么选择这些物质，这些物质有什么作用呢？

(1)人们根据微生物对养分物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的养分基质——培育基。虽然各种培育基的详细配方不同，但一般都含有五大养分要素，即水、无机盐、碳源(供应碳元素)、氮源(供应氮元素)和生长因子(不同的细菌须要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成实力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。见下表：

微生物的养分要素

定义

功能

类型

化合物类型

常用物质

碳源

凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的养分物质称为碳源

构成细胞物质，供应微生物生长发育所须要的能量

无机碳(自养型微生物用)

无机物

CO2、NaHCO3、CaCO3等

有机碳(异养型微生物用)

蛋白质、核酸类

牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、明胶、氨基酸等

糖类脂质等

葡萄糖、蔗糖、淀粉等

氮源

凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的养分物质称为氮源

主要是供应合成原生质和细胞其他结构的原料，一般不作能源

无机氮

铵盐

NH3、(NH4)2SO4

硝酸盐

KNO3

N2

空气

有机氮

牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明胶等

生长因子

一类对微生物正常代谢必不行少且又不能从简洁的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物

一般是酶和核酸的组成成分

酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦芽汁等，复合维生素

水

作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体

无机盐

作用：维持渗透压、pH等

(2)大肠杆菌的LB培育基

微生物的养分要素

本试验中大肠杆菌LB培育基配方

培育基配方与微生物养分要素的对应关系

LB液体培育基

LB固体培育基

氮源、

碳源、

无机盐、

生长因子、

水

琼脂1g

蛋白胨0.5g

主要供应大肠杆菌的氮源、碳源需求

酵母提取物0.25g

主要供应生长因子

NaCl0.5g

供应无机盐

水50mL

供应水

(3)此外配方中还要留意pH等。

3．该试验中这些操作的缘由

(1)三角锥形瓶中的LB固体培育基灭菌后，须要冷却到60℃左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培育基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？

因为三角锥形瓶中的LB固体培育基中有琼脂，它在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，当冷却到60℃左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培育基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培育基。

简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60℃左右了。

(2)进行恒温培育时，为什么要将培育皿倒置？

恒温培育时，培育基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培育皿则会使水蒸气凝聚成水滴留在盖子上；假如正放培育皿，则水分形成的水滴会落入培育基表面并且扩散开。假如培育皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分别的目的，培育皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。

(3)将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培育基中培育时，为什么接种环必需先深化到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？

接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，始终灼烧至红，温度很高，若不冷却就干脆用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培育失败。

(4)用划线法分别大肠杆菌中，第一次和随后的几次划线前都要灼烧接种环，它们的缘由一样吗？在划线结束后仍旧要灼烧接种环这又是为什么呢？

虽然每次灼烧都是为了灭菌，但所灭的菌种和缘由却不一样。

灼烧接种环的时间

歼灭的菌体

缘由

第一次划线前

其他杂菌

防止其他杂菌的侵入而造成污染

随后的几次划线前

上次划线结束后残留在接种环上的试验菌(本试验为：大肠杆菌)

为了使下一次划线时，接种环上的菌来自上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目渐渐削减，最终获得单个菌落，实现菌的分别

最终一次划线结束后

为了防止试验菌残留于接种环而污染环境和感染试验人员

(5)用划线法分别大肠杆菌时，每次的划线是怎么样的？对随后的划线的起点有什么要求？为什么这样要求呢？

每一次的划线

依次的2次划线之间的关系

各次划线的分布

图形协助理解

划线的要求

不能出现线条的重叠

其次次以及随后的划线操作，总是从上一次划线的末端起先

不要将最终一区的划线与第一区相连

这样要求的缘由

使线条末端细菌的数目比线条起始处要少

因为划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处