临床免疫定性实验的质量保证.ppt

*血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相;。细菌菌体中除可能含有内源酶对测定产生非特异性干扰外;IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底加深、甚至出现假阳性结果。通常情况下血清标本可在2～8℃下保存;则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果*长时间使用时会因机械磨损或者推动杆内附着血痂临床免疫定性实验的质量保证一、相关基础知识质量保证(QualityAssurance,QA)为一产品或服务满足特定质量,要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。也可以说是为了提供信任表明实体能够满足质量要求，而在质量体系中实施并根据需要进行证实的全部有计划和有系统的活动。室内质量控制（InternalQualityControl,IQC)由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由第三方机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来评价实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力比对检验（Proficiencytesting,PT）。01三大“标记”免疫检验技术:荧光标记、放射性核素标记和酶标02其它标记免疫测定技术：发光物标记、金标、镧系元素标记等03免疫沉淀和免疫凝集试验常用临床免疫检验方法根据权威部门发布的方法学评价结果，选用线性关系好、灵敏度高、特异性强、稳定性好的实验方法。03参照卫生部临床检验中心制定的临床检验操作规范中所推荐的方法。02公认的参考方法。01实验方法的选择方法的评估参数设定：真阳性TP，真阴性TN，假阳性FP，假阴性FN敏感性:患者中阳性百分率公式①：×100％特异性:非患者中阴性百分率公式②：×100％方法的评估公式：×100%诊断效率:准确区分患者及非患者能力01公式：×100%阳性预测值:在所有阳性结果中真患者百分率02方法的评估阴性预测值:在所有阴性结果中非患者百分率公式：×100%二、影响ELISA测定的因素标本收集实验室测定报告和解释灰区的设置结果报告和解释室内质控样本的外源性干扰因素：标本溶血标本被细菌污染标本贮存时间过长标本凝固不全冷冻保存标本避免反复冻融类风湿因子补体异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体溶菌酶磷脂药物小分子总蛋白浓度样本的内源性干扰因素：试剂盒的因素运输贮存色原底物：OPD和TMB酶结合物：酶免疫测定的核心成份抗体：多抗、单抗和基因工程抗体抗原:纯化、合成和基因工程抗原固相材料:聚苯乙烯塑料EDCBAF仪器的校准与标定酶标仪的校准一定要定时进行（一般使用频繁不超过半年，最多不超过一年）。加样器及水浴用温度计均应进行计量校准后使用，前者可采用称重法校准，后者可到国家计量单位进行。酶免疫测定操作中的注意事项加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释加样定期对移液器进行维护和校准加样不可太快，避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。全自动加样系统的标本“交叉污染”问题。操作时差对结果的影响温育常采用的温育温度有43℃、37℃、室温等。温育所需时间与温度成反比，即温育温度高，则所需时间相对较短。温育时，微孔板应置于水浴（浮于水面）或湿盒中，以使反应溶液的温度迅速与室温平衡。“边缘效应”的排除:使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度。洗板洗涤是ELISA测定过程中决定实验成败的关键步骤。洗板液一般为含0.05%Tween20的中性PBS。手工洗板要避免气泡残留孔内，洗板机洗板时，将洗液完全吸净，否则空白值将升高甚至出现“花板”现象