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中药复方药效研究新思路

——从银翘散展开来说银翘散源于清代医家吴鞠通所著5温病条辨6卷一,是治疗风温、温热以及某些杂病属于邪在卫分、上焦,治当辛凉清解者的代表方剂。现代用于治疗流行性感冒、急性扁桃体炎、咽峡疱疹、麻疹、流行性腮腺炎等病毒感染性疾病,为中医临床广泛应用、疗效确切的中药复方之一。1马小兵32宋宇翔靳贵林席亚丽牛亭惠小组成员:方剂【方名】银翘散【别名】银翘解毒散【出处】《温病条辨》卷一。【分类】解表剂-辛凉解表【组成】连翘一两（30克）银花一两（30克）苦桔梗六钱（18克）薄荷六钱（18克）竹叶四钱（12克）生甘草五钱（15克）荆芥穗四钱（12克）淡豆豉五钱（15克）牛蒡子六钱（18克）【用法】上杵为散，每服六钱（18克），鲜苇根汤煎，香气大出，即取服，勿过煮。肺药取轻清，过煮则味厚而人中焦矣。病重者，约二时一服，日三服，夜一服；轻者三时一服，日二服，夜一服-病不解者，作再服。（现代用法：加入芦根适量，水煎服，用量按原方比例酌情增减。）【方歌】银翘散治上焦疴，竹叶荆蒡豉薄荷；甘桔芦根凉解法，辛凉平剂用时多。【功用】辛凉透表，清热解毒。银翘散的现代研究材料与方法仪器：美国Waters高效液相色谱仪(515泵,2487检测器）,Millennium32色谱工作站);美国PE液相色谱/质谱联用仪(PESerials200型液相色谱仪,PESciexAPI3000型串连三级四极杆质谱仪);TU-1800型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。银翘散抗流感病毒有效部位(EFY)自制;乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。内标物香草醛为分析纯(含量99.19%);对照品绿原酸、甘草苷、甘草素-4c-O-芹糖(1→2)葡糖苷、异甘草素-4-O-芹糖(1→2)葡糖苷、异甘草素-2c-O-芹糖(1→2)葡糖苷、连翘酯苷、芦丁、4,5-二咖啡酰基奎宁酸、3、5-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-二咖啡酰基奎宁酸、牛蒡子苷、醉鱼草苷、染料木素及异甘草素由银翘散抗流感病毒有效部位中分得。色谱条件色谱柱:YWG-C18(250mm-416mmID,10mL);流动相:乙腈-3%醋酸水溶液梯度01洗脱(0-5min,乙腈比例:5%→10%;5-25min,乙腈比例:10%;25-55min,乙腈比例:10%→30%;55-95min,乙腈比例:30%→80%;95-100min,乙腈比例:80%);流速:110mL/min;柱温:25e;检测波长:280nm;进样量:10LL，理论塔板数以内标峰(S)计算,不低于5000。02质谱条件离子源:ESI;所有实验均在负离子扫描方式下进行。在LC-MS条件下,第一级四极杆处于全扫描模式,扫描范围m/z10010-80010,而第三级四极杆处于RF-ONLY模式。在进行LC-MS/MS实验时,质谱仪可在子离子扫描、多重反应监测和母离子扫描方式下工作。供试品溶液的制备精密称取内标物(香草醛)1115mg,以50%乙腈水溶液溶解,置于50mL量瓶,再以50%乙腈水溶液稀释至刻度,经0.145Lm滤膜滤过,备用。精密称取EFY6416mg并以适量50%乙腈水溶液超声使之溶解,完全转移至10mL量瓶,以50%乙腈水溶液稀释至刻度,经0.145mL滤膜滤过,备用。精密吸取EFY溶液8mL,内标物溶液2mL,混合均匀,即得供试品溶液。金银花、连翘、牛蒡子、桔梗、薄荷、淡竹叶、甘草、荆芥及淡豆豉均按银翘散有效部位制备工艺方法,制备相应的药材供试溶液。阴性溶液的制备依据各单味药在银翘散组方中的配比,除去某单味药而制成相应的阴性溶液。特征指纹图谱建立考察150minEFY的色谱分离情况,记录100min色谱图,以色谱图中峰S(香草醛)为内标,令其保留时间为1,以峰19(牛蒡子苷)为参照,令其峰面积为1,其他各峰的保留时间和峰面积分别与内标峰的保留时间和参照峰的峰面积相比较,作为各峰的相对保留时间和相对峰面积。组分归属分析及主要色谱峰的指认依据各单味药在特征指纹图谱中色谱保留时间信息及其阴性样品的考察,从而实现在相同的实验条件下所得的色谱指纹图谱中单味药与复方目标物质的相对归属分析。通过LC-MS/MS对主要色谱峰碎片离子的解析及添加对照品[绿原酸、甘草苷、甘草素-4c-O-芹糖(1→2)葡糖苷、异甘草素-4-O-芹糖(1→2)葡糖苷、异甘草素-2c-O-芹糖(1→2)葡糖苷、连翘酯苷、芦丁、4,5-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-二咖啡酰基奎宁酸、