DB3707T 133-2024 西瓜枯萎病菌鉴定技术规程.docx

ICS65.020.20

CCSB16

3707

潍 坊 市 地 方 标 准

DB3707/T133—2024

西瓜枯萎病菌鉴定技术规程

Technicalcodeofpracticeforidentificationofwatermelonfusariumwiltpathogen

2024-12-19发布 2025-01-20实施

潍坊市市场监督管理局??发布

DB3707/T133

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I

I

II

II

目 次

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

鉴定程序 1

田间取样 2

症状检查 2

病原菌的鉴定 3

过程记录及档案保存 4

附录A（资料性）西瓜枯萎病危害症状 5

附录B（资料性）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）配制方法 6

附录C（规范性）西瓜枯萎病菌致病性测定 7

附录D（资料性）西瓜枯萎病菌菌落形态及分生孢子形态特征 8

附录E（资料性）西瓜枯萎病菌DNA的提取 9

附录F（资料性）西瓜枯萎病菌PCR检测 10

参考文献 11

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由潍坊市农业农村局提出、归口并组织实施。

本文件起草单位：优奈尔生物科技有限公司、潍坊郭牌农业科技有限公司、潍坊市农业科学院。本文件主要起草人：由守昌、杨猛、金炳奎、王昌盛、徐立功、孙继峰、刘金宝、王海艳、王逍逍、

杨珊、辛国凤、杨琪、邢石磊。

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西瓜枯萎病菌鉴定技术规程

范围

本文件确立了西瓜枯萎病菌鉴定技术程序，规定了田间取样、症状检查、病原菌的鉴定、过程记录及档案保存的指示，以及上述阶段之间的转换条件，描述了过程记录、建立档案等追溯方法。

本文件适用于西瓜枯萎病菌的检测和鉴定。

规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

术语和定义

SN/T2589-2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

症状 symptom

植物受病原物或不良环境因素的侵扰后，内部的生理活动、外观或生长发育所显示的某种异常状态。[来源：SN/T2589—2010，定义3.2]

鉴定程序

西瓜枯萎病菌鉴定技术规程包括田间取样、症状检查、病原菌的鉴定、过程记录及档案保存4个阶段。程序流程如图1所示。

图1 西瓜枯萎病菌鉴定流程图

田间取样

宜选择在西瓜枯萎病发病初期至病情发展到一定程度（但尚未完全枯死）的植株。取样时，应戴好一次性手套，小心地将根部从土壤中取出，随后迅速将样本植株放入密封的塑料袋或适宜容器中。在低温条件下运输至实验室，如将样品放置在放有冰袋的泡沫盒中或4℃～8℃冷藏小冰箱内。运输过程中应严格避免样本受到挤压、碰撞和震动，可在容器内放置缓冲材料，如柔软的泡沫或海绵等。

症状检查

症状检查操作如下:

观察病株叶部有无西瓜枯萎病的可疑症状（见附录A），如出现叶片萎蔫、发黄、干枯等。

用小刀进行纵切和横切病株根部病健交界处，观察有无西瓜枯萎病的可见症状（见附录A），如基部有褐色条斑或发生表皮纵裂、维管束变褐等。

样本在经详细登记（包括样本来源、取样时间、取样地点等信息）和经手人签字后，应存放在4℃冰箱中冷藏，以备复核。当保存期满后，应采用高压灭菌处理后再行处置。应建立样本保存数据库，记录每个样本的保存位置、保存时长等信息。

病原菌的鉴定

实验用仪器设备和主要试剂的准备

实验仪器

实验仪器包括生物显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、高速冷冻离心机、PCR仪、凝胶成像仪、电泳仪、恒温培养箱、-80℃超低温冰箱、4℃冰箱、-20℃冰箱、组织破碎仪、微量移液器（0.1μL～

2.5μL、1μL～10μL、10μL～100μL、20μL～200μL、100μL～1000μL）等。

主要试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

——1%NaClO、75%酒精、30%灭菌甘油、灭菌石蜡油、琼脂、DNA提取相关试剂、PCR相关试剂、电泳相关试剂等。

——试验中除PCR试验所用的试剂配制为三级水外，其他用水均为一级水。

——马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）（配制方法见附录B）。

病原菌的培养

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