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汇报人：文小库2024-12-16病理组织切片制作步骤

目录CONTENTS病理组织准备组织包埋与切片苏木精-伊红（H-E）染色流程显微镜下的病变观察与诊断常见问题与解决方案实验安全与卫生管理

01病理组织准备

病变部位的选择应选择具有病变代表性的部位，尽可能包含病灶及周围组织，以便全面了解病变情况。病变程度的选择根据病变的发展阶段，选择适当的病变程度，以便准确反映疾病的本质。组织类型的选择不同组织类型的病变具有不同的特点和诊断价值，因此应选择最能反映疾病特点的组织类型。选取合适病变组织

通常采用10%福尔马林溶液进行固定，以保持组织的形态和结构。固定方法固定时间应根据组织大小和厚度进行调整，一般需数小时至数十小时不等。固定时间固定后的组织应放置于适宜的保存液中，如70%乙醇等，以防止组织腐败和变质。保存方法组织固定与保存方法010203

切割成适宜大小及形状切割形状根据实验需要和观察目的，切割成不同的形状，如长方形、正方形、梯形等。切割大小根据显微镜的放大倍数和组织的大小，切割成适宜大小的切片，一般为数毫米至数厘米不等。切割工具使用锋利的刀具或切片机进行切割，以确保切片的完整性和清晰度。

02组织包埋与切片

组织选取与处理将处理好的组织块放入液态石蜡中，使石蜡逐渐渗透进入组织内部，然后用石蜡包埋组织，形成蜡块。石蜡渗透与包埋包埋注意事项石蜡温度要适中，过高易使组织烫坏，过低则难以切片；包埋时要确保组织块完全浸没在石蜡中，避免产生气泡。选取适当大小的病变组织，进行固定、脱水、透明等处理，以便更好地保持组织形态。石蜡包埋技术要点

切片机操作规范及注意事项010203切片前准备检查切片机各部件是否完好，调整切片厚度和切片角度，确保切片质量。切片操作将包埋好的组织块固定在切片机上，摇动切片机手柄进行切片，切片时要保持匀速、平稳，避免切片过厚或切到组织边缘。切片后处理将切好的薄片放入温水中展平，然后用载玻片轻轻捞起，放入烤片机中烘烤至水分完全蒸发。

切片厚度应均匀一致，无明显的厚薄差异，一般控制在4-6微米之间。薄片厚度切片应完整无缺，无断裂、皱褶等现象，能够清晰地显示出组织的细胞结构。薄片完整性薄片应经过适当的染色处理，使组织细胞结构更加清晰可见，染色要均匀、适度，无过染或不足现象。染色效果薄片质量控制标准

03苏木精-伊红（H-E）染色流程

苏木精染色原理及步骤染色原理苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用。染色步骤将组织切片放入苏木精染液中，使细胞核着色。媒染剂的作用媒染剂能促进苏木精与细胞核的结合，使染色更加牢固。染色时间染色时间根据组织类型和切片厚度而定，一般在几分钟至半小时之间。

伊红染色原理及步骤染色原理伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色。染色步骤将组织切片从苏木精染液中取出，放入伊红染液中，使细胞质着色。染色时间染色时间较短，一般在几分钟内完成。染色效果伊红染色后，细胞质呈现红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

使用分化液将苏木精和伊红混合染色的切片进行分色处理，使细胞核和细胞质的颜色更加清晰。将切片放入梯度酒精中脱水，以去除多余的水分和染料。用中性树胶封片，然后在显微镜下观察染色效果，注意细胞核和细胞质的颜色对比以及组织结构的清晰度。根据染色效果和观察结果，评估染色是否达到预期目的，以及是否存在染色不均或着色过深等问题。染色后处理与观察技巧分色处理脱水处理封片与观察染色效果评估

04显微镜下的病变观察与诊断

调整显微镜的焦距和光线，确保观察的组织切片清晰、层次分明。显微镜的调节选择具有代表性的病变区域，并确定病变部位的具体位置。切片的选择与定位按照由低倍到高倍、由表及里的顺序进行观察，并详细记录病变特点。观察顺序与记录显微镜操作方法及注意事项010203

病变的形态学特征包括病变细胞的形态、大小、染色质变化等，以及病变组织的结构特点。病变的分级与分类根据病变的严重程度和累及范围，对病变进行分级和分类。鉴别诊断与误区避免与其他类似病变进行鉴别诊断，避免误诊或漏诊。病变特征识别与分类标准

病理诊断的依据结合临床表现、影像学检查、实验室检查及病理切片观察等多方面资料，进行综合分析。病理诊断的流程初步诊断→病理会诊→最终诊断，必要时还需进行免疫组化等辅助诊断。病理报告的撰写准确、客观地描述病变特点，给出病理诊断结论，并提出治疗建议。病理诊断依据和流程

05常见问题与解决方案

切片厚薄不均可能是由于切片刀角度不当或切片速度过快所致，需调整切片角度和速度。切片卷曲或折叠切片丢失或破碎可能是由于组织处理不当或切片时操作不慎所致，需重新取材制作切片。可能是由于切片刀不够锋利或切片时力度不均匀所致，需及时磨刀或调整切片力度。切片质量问题及改进措施

需根据染色剂的种类和浓度，掌握适当的染色时