《细胞生物学》第3章 细胞生物学研究方法-教学课件（非AI生成）.ppt

第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术细胞的培养细胞工程*一、细胞的培养动物细胞培养类型：原代培养细胞（primaryculturecell）：培养来自动物机体的细胞群。将细胞转移到新的容器中培养称为传代或传代培养（passage），每代细胞分裂约3-6次。

继代培养细胞（sub-culturecell）细胞株（cellstrain）正常二倍体，接触抑制细胞系（cellline）亚二倍体，接触抑制丧失植物细胞类型：原生质体培养（体细胞培养） 单倍体细胞培养（花药培养）*细胞系（cellline）：原代培养细胞成功传代即为细胞系。细胞株（cellstrain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。

*表三、实验室中常用的几种细胞系

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*一、细胞培养

（一）动物细胞培养

群体培养（massculture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层；

克隆培养（clonalculture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。

群体培养（左）和克隆培养（右）

**二、细胞工程细胞融合（cellfusion）与细胞杂交（cellhybridization）技术细胞融合生物、化学、物理方法染色体丢失单克隆抗体（monocloneantibody）技术图3-24显微操作技术与细胞拆合*单克隆抗体技术

B淋巴细胞能分泌特异抗体，但不能长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌特异抗体。于是Kohler和Milstein1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖

**第四节细胞及生物大分子动态变化*一、荧光漂白恢复技术（fluorescencephotobleachingrecovery,FPR）淬灭、不可逆分子动态、速率图3-26*二、单分子技术光谱、力学酶学反应、电子转移*三、酵母双杂交技术**四、荧光共振能量转移技术（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）用于检测分子的相互作用10nm图3-29CFP、YFP*五、放射自显影技术原理及应用：利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究；实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。步骤：前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记）——放射自显影*第五节模式生物与功能基因组模式生物：病毒、细菌、酵母、线虫、果蝇、斑马鱼、小鼠、拟南芥等突变体制备：RNAi、基因敲除蛋白质组学：2-DE、色谱、质谱、芯片、生物信息学*几种模式生物Caenorhabditiselegans*Arabidopsisthaliana*drosophilamelanogaster**细胞生物学研究的主要技术与手段观察细胞显微结构的光学显微镜技术；探索细胞超微结构的电子显微镜技术；研究蛋白质和核酸等生物大分子结构的X射线衍射技术；用于分离细胞内不同大小细胞器的离心技术；用于培养具有新性状细胞的细胞融合和杂交技术；使机体细胞能在体外长期生长繁殖的细胞培养技术；能对不同类型细胞进行分类并测其体积、DNA含量等数据的流式细胞术；利用放射性同位素对细胞中的DNA、RNA或蛋白质进行定位的放射自显影技术；用于探测基因组中某种基因是否存在，是否表达以及拷贝数多少的核酸分子杂交技术；能将细胞中的特定蛋白质或梳酸分子进行分离纯化的层析技术和电泳技术；对细胞化学定性、定量分析的显微分光光度术，显微荧光光度术，核磁共振技术。*细胞生物学研究方法

细胞形态结构的观察方法细胞组分的分析、检测方法细胞培养、细胞工程细胞及大分子的动态变化模式生物、功能基因组*第一节细胞形态结构的观察方法

光学显微镜技术（lightmicroscopy）0.2微米电子显微镜技术（Electromicroscopy）0.2纳米扫描探针显微镜（ScanningProbeMicroscope）扫描遂道显微镜（scanningtunnelingmicrosc