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饭疏食，饮水，曲肱而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。——《论语》

PCR扩增过程中污染的预防与对策

第一篇：PCR扩增过程中污染的预防与对策

pcr技术是聚合酶链反应，该技术可将极微量的靶dna特异的扩

增上百万倍，从而大大提高对dna分子的分析和检测能力。pcr反应

的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，操作复杂，所以在

其操作过程中常有污染发生，即使极少量的污染也会造成假阳性，稍

有差错就会出现假阴性。

本文讨论pcr扩增过程中污染的预防与对策。操作者必须熟练掌

握技术，严格按操作规程操作，防止假阳性、假阴性结果的产生。

污染的原因调查

标本间的污染；采集标本的容器被污染；提取过程中加样枪污染；

试剂的污染；提取过程中气溶胶的污染等。

防止污染的预防与对策

实验人员要熟练掌握pcr操作技术，严格规范操作程序，操作过

程中加样枪的使用，手套、枪头、离心管应一次性使用。严格按试剂

生产厂家提供的程序进行操作。

严把质量关，在操作当中总结，马上到期的试剂或刚过期试剂对

pcr结果影响很大。

设立阴性质控和阳性质控：阴性质控以监测试剂是否污染，阳性

质控以监测pcr反应是否成功，产物大小是否合本理论要求。

实验室设置及设备的规范化

实验室划分为4区：试剂准备区、，标本准备区、pcr循环扩增区、

检测区。扩增仪的设置要符合要求，取样器刻度准确，减少pcr循环

次数，只要pcr产物过剩检测水。

近年来pcr技术已普及到各基层医院，广泛地用于感染性病原体，

如hbvhcv的临床检测，由于缺乏对核酸扩增检验技术完整的了解以

及缺乏质量保证措施，导致部分实验室结果出现假阳性、假阴性的出

现，所以操作者必须熟练掌握技术，严格按操作规程操作，防止假阳

性，假阴性结果的产生。

饭疏食，饮水，曲肱而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。——《论语》

第二篇：16sRNAPCR扩增及凝胶电泳分析实验报告

16sRNAPCR扩增及凝胶电泳分析

微生物学王紫枫

一、实验目的1．熟悉细菌活化及培养过程

2．掌握PCR扩增技术及方法

3．掌握凝胶电泳分析技术

二、实验原理

rRNA进化缓慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序

列在某些位点以不同的几率发生突变。同时，小核糖体亚基16sRNA

分子量大，携带信息量大，可作为属种鉴定的基础。

通过筛选的细菌，做活化培养后，细菌在缓冲液酶解，通过细胞

破壁、裂解、离心得到RNA相关序列，在经过设定PCR相关条件。

温度、循环次数，将裂解液加入到体系中进行扩增。在完成循环后进

行凝胶电泳、拍照、序列分析。

三、实验用品

供试菌种53种、编号试管每株两个LB固体和液体培养基、Mg2+、

无菌水、EBBuffer、TE离心管、移液枪