聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质..pdfVIP

为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。——张载

实验七聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质

一实验目的

掌握聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质。

二实验原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰化胺凝胶作支持物的一种区带电泳，由于

此种凝胶具有分子筛的性质，所以本法对样品的分离作用，不全决定于样品各组

分所带净电荷的多少，即在电泳开始阶段，由于不连续pH梯度的作用，将样品

压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状立体结构，很少带有离子的侧基，惰性好，电泳时，

电渗作用小，几乎无吸附作用，对热稳定，呈透明状，易于观察结果。

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂亚甲基双丙烯酰胺（简

称Bis）在催化剂的作用下，聚合交联而成的含有酰化胺基侧链的脂肪族大分子

化合物。

三实验器材

1、血清及其他蛋白质样品。

2、移液器。

3、稳压直流电源（500V）。

4、玻璃管0.5cm×7-10cm(×10)。

5、灯泡瓶。

6、注射器10ml(×1)。

7、滴管。

8、培养皿10cm(×5)。

9、圆盘电泳槽。

10、量瓶25ml（×1）、10ml（×1）。

四实验试剂

1、1mol/LHCL。

2、丙烯酰胺（Acr）：

3、N，N，N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED):密封避光保存.可用N-二甲氨基丙腈

为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。——张载

或三乙醇胺代替,但效果较差.

4、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(Bis):

5、三羧甲基氨基甲烷(简称Tris).

6、过硫酸铵(A.R)(聚合用催化剂)

7、0.05％氨基黑10B溶液:称取50mg溶于100ml水中.

8、冰醋酸.

9、0.05％溴酚蓝溶液:称取50mg溴酚蓝加水溶解并定容到100ml

10、40％蔗糖。

11、20％蔗糖-溴酚蓝溶液：100ml20％蔗糖溶液加50mg溴酚蓝

12、甘氨酸-Tris缓冲液：称取甘氨酸28.8mg，Tris0.6g加水定容至1000ml

（pH8.3）

13、1％考马斯亮蓝G250。

五实验方法

1、贮备液配置

A液－小孔胶缓冲液：1mol/LHCL12mlTris18.3gTEMED0.12ml用稀HCL

调PH至8.9，家水至50ml，混浊可过滤。

B液—大孔胶缓冲液：1mol/LHCL12mlTris1.5gTEMED0.12ml用

稀HCL调PH至6.7加水至25ml

C液－小孔胶单体溶液：丙烯酰胺７g亚甲基双丙烯酰胺0.184用25ml容量瓶容

定后过滤.

D液－大孔胶单体溶液:丙烯酰胺1g亚甲基双丙烯酰胺0.25g用10ml容量瓶容

定后过滤..

E液－40％蔗糖溶液.

F液－0.14％过硫酸铵溶液(要新配,试剂要好)

以上试剂需要放入冰箱保存,前四种溶液,配制后如超过两个月需要重新配制.尤

其是C,D两液,由于Acr及Tris容易水解生成丙稀酸和NH冷藏也只能保存1-2