微生物检验技能—细菌的药敏试验.pptx

扩散法药敏试验;知道药敏试验的概念、用途和意义

会依据细菌选择相应的抗生素

会正确进行扩散法药敏试验

会使用麦氏比浊管正确配制适当浓度的菌液

会正确使用游标卡尺测量抑菌环的直径

能准确判断扩散法药敏结果;药敏试验的概念;常用方法有:

纸片扩散法（Kirby-Bauertest）

稀释法（dilutiontest）

E试验法（Etest）

杀菌试验

体外联合药物敏感试验

;K-B法药敏试验;抗菌药物纸片

6.35mm，吸水20μl。（一般用商品纸片）

菌液

用生理盐水或营养肉汤取纯培养的菌落制备成浊度为0.5麦氏比浊标准的菌液。

;方法

将0.5麦氏浊度标准的菌液涂布接种于MH琼脂表面，按纸片间距24mm和边距15mm的标准，加贴相应药敏纸片，35℃培养16-18h，判定结果。;操作方法;2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。;操作方法;操作方法;操作方法;操作方法;操作方法;抗生素的选择;肠杆菌科细菌

哌拉西林(PIP)头孢他啶(CAZ)头孢吡肟(FEP)

头孢噻肟(CTX)头孢曲松(CRO)亚胺陪南(IMP)

胺曲南(AZT)庆大霉素(GEN)阿米卡星(AMK)

四环素(TET)环丙沙星(CIP)左氧氟沙星(LVF)

加替沙星(GTF)氯霉素(CHL)复方新诺明(SXT)

氨卞西林(AMP)奥格门汀(AVG）头孢唑啉(CFZ)

萘啶酸(NAL)头孢呋肟(CXM)

;肠球菌属细菌

青霉素(PEN) 氨卞西林(AMP)

万古霉素(VAN)替考啦林(TEL)

红霉素(ERY)四环素(TET)

环丙沙星(CIP)呋喃妥因(FD)

高浓度庆大(GEH)高浓度链霉素(STH);操作方法;操作方法;9.取抑菌环直径，根据CLSI（clinicalandlaboratorystandardsinstitute）标准，报告细菌对该抗生素

敏感(susceptible,S)、

耐药(resistant,R)、

中介(intermediate,I)。;MH琼脂;巧克力MH;血MH;;其他药敏试验;产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）测定;单纸片扩散法（初筛试验）;产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）测定;ESBL初筛试验结果;ESBL初筛试验结果;ESBL确证试验;ESBL确证试验;ESBL确证试验;ESBL确证试验;ESBL确证试验;β-内酰胺酶测定试验;说出K-B法实验原理

说出药敏试验用MH平板制作标准

说出K-B法用纸片标准

怎样选择革兰???性球菌药敏用抗生素

怎样选择革兰阴性杆菌药敏用抗生素

怎样使用有标卡尺测量抑菌环;稀释法药敏试验;知道MIC的含义

会正确稀释抗菌药物

会配制试验用浓度菌液

会稀释法药敏试验操作

会正确判断实验结果

知道如何进行稀释法药敏试验的质量控制;稀释法药敏试验的目的;液体稀释法;方法：

（1）排列10-15支试管，从第2管起，每管加入M-H液体培养基1ml。

（2）吸取抗菌药物原液（1000μg/ml）5.12ml、M-H液体培养基4.88ml于第1管中混匀，取出1ml加入第2管混匀，从第2管取1ml加入第3管混匀，依次倍比稀释至第15管。

（3）加入待检菌悬液每管0.05ml混匀。置35℃培养12~18h后观察结果。

同法做对照菌药敏试验。

;操作方法;操作方法;;操作方法;微量液体稀释法(microdilutiontest);操作方法;2.抗菌药物母液的稀释;3.在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。;操作方法;操作方法;操作方法;7.手工看浊度或仪器自动判读。按照CLSI标准报告细菌对某抗菌药物为敏感、耐药和中介。;结果判断：

MIC：肉眼观察无菌生长管的药物浓度。

MBC：用0.01ml定量接种环从肉眼观察无菌生长管中取一环材料，接种到血平板上，35℃培养过夜后观察结果，99%的原始接种细菌被杀死的材料管药物浓度为最小杀菌浓度。;琼脂稀释法;各种抗菌药物的稀释方法;方法：