综合性实验三、抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定.doc

西安医学院教案

（专业课程）

课程名称

临床免疫学与检验

班级

检本1008

专业，层次

检验，本科

教师

武永红

专业技

术职务

讲师

授课方式

（大，小班，实习）

实验

学时

9学时

授课题目（章，节）

抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定

基本教材或主要参考书

王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012

刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009

曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011

教学目的：

1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价，

2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。

教学内容：

1.细菌培养与免疫原的制备

2.“O”和抗“H”血清的制备

3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价

4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价

教学方法：启发式教学；讲授重点内容。

教具：板书示教

教学重点、难点：

1.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价

教研室审阅意见

（教研室主任签名）

年月日

教学内容

教学手段

时间分配

抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定

（一）细菌培养与免疫原的制备

（二）“O”和抗“H”血清的制备

（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价

（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价

（一）细菌培养与免疫原的制备

伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板

→生理盐水菌液（100℃

（二）“O”和抗“H”血清的制备

Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清

O/H抗原的免疫程序：

日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径

11皮内五点注射

81.5耳静脉注射

151.5耳静脉注射

221.5耳静脉注射

放血方法：颈动脉采血

试血方法：试管凝集试验

（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价

试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。

步骤和方法：

1．试管编号标记。

2．试管凝集操作程序（单位：ml）

管号 1 2 3 4 5 67 89（对照）

生理盐水 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.50.50.5

1：10血清0.1 0.5 0.50.50.50.50.50.5弃0.5

诊断菌液 0.5 0.5 0.50.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5

终稀释度1:20 1:40 1:80 1:1601:3201:6401:12801:2560-＃

摇匀置37℃2~4h

结果和评价

判断凝集试验结果，要有良好的光源和黑暗的背景，先不振摇，观察试管底部凝集物和上清的浊度。然后轻轻摇动试管，逐一观察凝集颗粒的松软度、大小、均匀度等性状及液体的混浊程度。

1．先观察盐水对照管凝集现象，轻轻摇动试管，细菌分散均匀混浊。

2．伤寒沙门菌O抗原凝集物呈颗粒状沉于管底，轻摇时不易散开（H抗原凝集物呈絮状，疏松而大块地沉于管底，轻摇易离散）。凝集程度通常以“+”表示强弱。

“4+”很强，细菌全部凝集，凝块全沉于管底，液体澄清，凝块全沉于管底。。

“3+”强，细菌大部分凝集，液体稍混浊。

“2+”中等强度，细菌约50%凝集沉于管底，液体较混浊。

“+”弱，仅少量细菌凝集，液体混浊。

“—”不凝集，液体混浊度与对照管相同。

3．只要待测血清管出