研究轻、老龄红细胞表面Zeta电位的测量条件-细胞生物学论文-生物学论文.pdfVIP

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

研究轻、老龄红细胞表面Zeta电位的测量条

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骨髓间充质干细胞是一类非造血干细胞，来源于中胚层，具有

多分化潜能，具有自我更新能力，易于分离培养，体外增殖能力强的

特点。骨髓间充质干细胞在体内发挥调节免疫，减轻炎症反应，组织

再生，损伤修复，维持内环境稳态的作用.

在进行自体移植方面具有安全，无致瘤性，无组织配型和免疫

排斥的问题，因而成为组织工程与再生医学研究的焦点。种子细胞是

组织工程的关键因素之一。骨髓间充质干细胞可以分化为骨细胞，软

骨细胞，肌腱，肌肉细胞，成纤维细胞，脂肪细胞，肝细胞，甚至神

经元细胞。为结缔组织等相关疾病中的骨、软骨、肌腱等的损伤修复

提供了潜在的细胞来源，被认为是骨组织工程中有价值的种子细

胞.hMSCs的成骨定向导可为骨组织工程技术治疗大段骨缺损提供

种子细胞，满足其在种子细胞数量和质量上的需要。实验通过全骨髓

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

培养法分离hMSCs,并用导分化培养液做定向导培养，观察hMSCs

向成骨细胞分化过程中的细胞形态学变化，进行成骨细胞生物学表型

鉴定以探讨hMSCs的培养方法、生长规律及向成骨细胞分化的条件。

1材料与方法

1.1材料

1.1试剂及细胞

培养基-MEM,0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA,L-谷氨酰胺，青霉素/

链霉素双抗，胎牛血清（FBS），Trizol裂解液购自公司；四氮唑蓝（MTT），

茜素红S,-甘油磷酸钠，地塞米松和维生素C,蛋白质裂解液RIPA购

自Sigma公司；碱性磷酸酶活性检测试剂盒，购自CellBiolabs公司；

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

逆转录试剂盒购自Qiagen公司，引物由Invitrogen公司合成；抗体

RUNX2,BMPR2,GAPDH购自CellSignaling公司。人骨髓间充质成体干

细胞第一代传代细胞由GeneTherapy提供。

1.1.2成骨导培养基

基础培养基（内含体积百分比为16.5%的胎牛血清+-MEM+1%青

霉素/链霉素+2mML-谷氨酰胺），加入20mM的-甘油磷酸钠，10nM

地塞米松，100M维生素C配制成成骨导培养基。

1.2方法

1.2.1数量为1的细胞接种于直径为10cm的培养皿中，用含

16.5%FBS的-MEM培养液，于37℃，5%CO2,饱和湿度95%的CO2培

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养箱中培养，3~4天细胞达到80%融合时用0.25%胰蛋白酶

-0.01%EDTA消化传代。根据实验需要重新接种在合适培养瓶或培养

皿中。6孔板中用于钙结节染色分析，96孔板中用于MTT实验和碱

性磷酸酶（ALP）检测，10cm直径培养皿用于提取总RNA和蛋白质，

分别用于RT-PCR和蛋白质印迹实验。导分化培养组（实验组）加

入导分化培养液，基础培养组（对照组）加入等量基础培养液，每3

天换液一次。