农产品质量安全检测技术培训系列之.pptVIP

*农残检测常用方法技术要点卞红正安徽省农产品质量安全检测中心农业部农产品质量安全监督检验测试中心（合肥）★农产品质量安全检测技术系列之主要内容速测方法3准确定性定量检测法4当前常用检测方法2前言112国家标准化管理委员会颁布国家标准（GB）;农业部颁布行业标准（NY）;国家进出口商品检验检疫总局颁布行业标准，编号为SN。以前农残检测方法的颁布：截至目前，已颁布的农产品和食品农药残留检测方法标准共有390多个。其中：国家标准92个，农业行业标准35个，商检行业标准约270个。已颁布标准前言根据2009年6月1日实施的《中华人民共和国食品安全法》第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉及食品安全的标准（八个方面），统一由国务院卫生行政部门部制定和颁布，国务院标准化行政部门提供国家标准编号。对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。农残检测方法标准全部统一为食品安全国家标准。前言当前常用检测方法一、当前常用检测方法二、速测方法1．快速检测程序试样检测阴性阳性复测（两次以上）阴性阳性根据市场规定处理准确定量定性分析二、速测方法GB/T5009.199-2003NY/T448-2001适用范围蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）适用叶菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除萝卜、茭白等)方法速测卡法(纸片法)和酶抑制率法(分光光度法)酶抑制率法(分光光度法)波长412nm410±3nm酶乙酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解）（3min吸光度变化值＞0.3，4℃冰箱保存不超过4天）丁酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解）3min吸光度变化值0.4—0.8之间底物硫代乙酰胆碱（蒸馏水溶解，4℃冰箱保存不超过2周）碘化硫代丁酰胆碱（BTCI）（用pH8磷酸缓冲液溶解）显色剂二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氢钠缓冲液溶液，4℃冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）缓冲液溶解步骤取表面干净的蔬菜或瓜果，叶菜类取叶片部分，瓜果取表皮带肉，剪成1cm左右见方碎片。取样1g置于小烧杯内，加入5mL缓冲溶液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟；于小试管内分别加入2.5mL样本提取液、100uL酶液、100uL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，加入100uL底物，应立即倒入仪器比色皿中，记录3min吸光度变化值。取2g切碎的样本（非叶菜类取4g）放入提取瓶内，加入20mL缓冲液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟；于小试管内分别加入50uL酶液、3mL样本提取液、50uL显色剂，于37-38℃下放置30min后分别加入50uL底物，倒入比色皿中，用仪器测定。结果抑制率≥50%：阳性（阳性样品需要重复检测2次以上，若不合格,用色谱、质谱等进一步定性定量分析）抑制率≥70%：阳性（阳性样品应有2次以上的重复检测，若不合格,用色谱、质谱等进一步定性定量分析）备注1、当温度低于37℃时，酶反应速度放慢，加入酶液和显色剂后反应时间应该延长，延长时间的确定，应以空白对照测试3min吸光度变化值＞0.3方可进行下一步操作。2、3min吸光度变化值＜0.3原因：①酶的活性不够；②酶的活性太低。3、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。1、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。2、丁酰胆碱酯酶对乐果、甲基对硫磷、毒死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。二、速测方法2．结果计算抑制率（%）=抑制率：酶被抑制的程度△Ac—对照组3min后与3min前吸光值之差;△As—样本3min后与3min前吸光值之差。2011年首届全省农产品质量安全检测技术人员大比武现场操作评分细则（农残速测类）(2011年)中对取样部位、处理方法等内容进行详细的分项打分，这些打分项都是平时检测中需要注意的地方。所有操作步骤顺序、加液量、处理时间一定要严格按标准执行。检测前一定要检查酶液活性（3min吸光度变化值＞0.3）；酶液反复解冻最多不超过两次,否则会影响酶活性。注意事项适用范围：蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）；农药：有机磷和氨基甲酸酯类。建议使用同一批比色皿，不同批次的比色皿对结果可能存在影响。一批上机样品同时检测，共用一个对照。二、速测方法如