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非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮
实验四糖化酶摇瓶实验
一）实验目的
掌握糖化酶摇瓶实验的基本操作。
二）实验原理
摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过将装有液体培养物的三角瓶放在摇床上
振荡培养，以满足生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。
三）实验材料
1、菌种黑曲霉（Aspergillusniger）。
2、培养基玉米粉12g，豆饼粉4g,麸皮2g,水200ml。
3、器材500ml三角瓶，载玻片，摇床等
四）方法步骤
1、配制培养基
玉米粉6%，豆饼粉2%，麸皮1%。补足水分，原料浸入水中。8层纱布+牛皮纸包扎，0.1MPa
下灭菌30min。500ml三角瓶1瓶/小组。装液量分别为100ml2个小组、200ml2个小组
2、接种
成熟斜面，在无菌条件下，注入10ml无菌水，振荡成孢子悬浮液。待发酵培养基灭菌后冷
却到30～32℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2ml，做好标记。
3、培养
将三角瓶固定在摇床上，培养温度为31℃，转速为200rpm/min，培养时间为96h。
4、显微镜观察菌丝形状，测量发酵液pH，测定糖化酶活力。
【实验结果】
1、比较三种不同装液量条件下的菌体形状特征、酶活力，将结果填入表格
接种量
100ml200ml
菌丝体数比100ml中的
菌丝生长呈扩散形，具有多且孢子体数量也较多。菌丝
菌体特征大量球形孢子，少数菌丝有横中有横隔出现，孢子囊呈球
隔，菌丝体大多呈管状。形，并处于不同生长分裂时
期。
非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮
pH2.54.0
实验五糖化酶的分离和提取
一）实验目的
掌握酶工程中的一些分离和提取方法。
二）实验原理
酶的分离提取首先要除去发酵液中的悬浮固形物，获得澄清的酶液；然后进行适当浓度
的浓缩；其次将酶沉淀，然后收集沉淀；干燥、磨粉、获得粉状制剂。
黑曲霉糖化酶是一种胞外酶，提纯工艺比较简单。首先采用过滤法将菌体等杂质除去，
继而对滤液进行浓缩，最后将酶沉淀出来，对沉淀物进行干燥，加工成成品。
糖化酶的沉淀可采用硫酸铵盐析法，也可采用有机溶剂如乙醇沉淀。
三）实验材料
1、液体培养
将黑曲霉从斜面转接到液体三角瓶，28度，200rpm培养96h
2、溶液及试剂
盐酸、无水乙醇、硫酸铵等
3、器材
漏斗、离心机、抽滤泵、抽滤瓶、蒸发器、布氏漏斗、天平、干燥箱、定量滤纸
四）方法步骤
1、发酵液过滤
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