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实验九甲醛滴定法测定氨基酸

一、目的

掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理

和操作要点。

二、原理

氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下

平衡：

HN+—R—COO—HN—R—COO—

32

+H+

-NH是弱酸，，完全解离时pH为11～12或

3

更高，若用碱滴定-NH所释放的H+来测量氨

3

基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指

示终点。

常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结

合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，

促使-NH释放H+，使溶液的酸度增加，滴

3

定终点移至酚酞的变色域内(pH9.0左右)。因

此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液

滴定。

R-CH(COO—)-NHR-CH(COO

3

—)-NH2+H+NaOH中和

R-CH(COO—)-NH2HCHOR-CH(COO

——

)-NHCH2OHR-CH(COO)-N(CH2OH)2

HCHO

如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴

脯氨酸与甲

定的结果可算出氨基氮的含量（

醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏

低。酪氨酸的滴定mL数偏高）。如样品是

多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴

定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简

便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。

随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不

再增加时，表示水解作用已完全。

三、器材药

25mL锥形瓶；3mL微量滴定管；吸管；

0.1mol／L标准甘氨酸溶液300mL准确

称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL；

0.1m01／L标准氢氧化钠溶液500mL；

（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密

闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中

的剩余氢氧化钠。）

酚酞指示剂20mL0.5％酚酞的50％乙醇溶

液

中性甲醛溶液400mL在50mL36～

37％分析纯甲醛溶液中加入1mL0.1％酚酞乙

醇水溶液，用0.1mol／L的氢氧化钠溶液滴

定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临

用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重

新中和。

四、操作

1．取3个25mL的锥形瓶，编号。向

第1、2号瓶内各加入2mL0.1mo1