常见病原性球菌—葡萄球菌属的检验（微生物检验技术）.pptx

;;球菌概述;葡萄球菌属微生物鉴定技术;一、生物学特性

（一）形态与结构

本属菌多为球形，直径0．5-1．5um。葡萄球菌无鞭毛，无芽胞、无荚膜。G+球菌，当菌体幼龄、老龄或死亡变为G-球菌。

1．在液体培养基上呈单个、成双或短链状排列。

2．在固体培养基上呈葡萄串状排列。

3．脓汁标本中呈单个散在或少数呈葡萄串状排列。;表皮葡萄球菌电镜图;金黄色葡萄球菌革兰染色（外伤感染）;葡萄球菌属微生物鉴定技术;（二）培养特性

葡萄球菌为需氧和兼性厌氧菌，对营养的要求不高，在普通营养琼脂（普皿）上生长良好。

最适pH值为7．4-7．6，最适温度为35-37℃。在20%CO2中有利于毒素形成。

1．在液体培养基：37℃18-24h，呈均匀混浊生长。

2．在普皿上：37℃24h，不透明、光滑、圆形、凸起、边缘整齐、直径1-5mm，通常是1-2mm，不同菌株可产生不同的脂溶性色素，如：金黄色、白色、柠檬色菌落。;金黄色葡萄球菌菌落;葡萄球菌属微生物鉴定技术;葡萄球菌属微生物鉴定技术;（二）培养特性

5．卵黄高盐琼脂平板：金黄色葡萄球菌卵磷脂酶，在此培养基上，在菌落周围可形成白色沉淀圈。;（三）生化反应：

葡萄球菌的生化活性强，能分解多种糖类，蛋白质和氨基酸，触酶阳性。;（四）细胞壁抗原

1．蛋白抗原：

葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成分，称为葡萄球菌A蛋白（SPA），是具有种、属特异性而无型特异性的完全抗原。

SPA可与人类IgG抗体的Fc段非特异性结合，而不影响Fab段与特异性抗原结合的功能。故可用之作为检测多种微生物抗原的实验室技术的重要试剂，简

单、快速的协同凝集试验。

;葡萄球菌属微生物鉴定技术;（五）分类

葡萄球菌属可根据DNA的同源性、色素、生化反应及是否产生血浆凝固酶等不同方法进行分类。

临床上常见的葡萄球菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌和溶血性葡萄球菌4种，根据是产生血浆凝固酶将葡萄球菌分为凝固酶阳性和阴性两大类。

传统的分型方法有噬菌体分型法。新颖的分型方法为分子生物学方法，如质粒图谱分析和细菌染色体指纹图谱分析已广泛用于作为葡萄球菌所致医院感染的监控手段。

;（六）抵抗力：

葡萄球菌是抵抗力最强的无芽胞细菌，在已干燥的脓、痰、血中仍可存活数月。置80℃30min，或50g/L的石炭酸溶液、1g/L的升汞溶液中15min可被杀死。1/20万的龙胆紫可抑制其生长。

;二．临床意义：

（一）致病物质：

1．毒素：

（1）肠毒素：耐热，100℃30min不被破坏。

（2）红疹毒素：作用血管。

（3）表皮剥脱毒素

（4）其他毒素：溶血毒素、杀白细胞素等。

2．酶：

（1）血浆凝固酶：结合型血浆凝固酶

游离型血浆凝固酶

（2）耐热核酸酶：耐100℃15min。

;葡萄球菌属微生物鉴定技术;三．微生物学检验：

（一）标本采集：根据不同病症及临床体征采集不同的标本。

化脓性感染病灶采集浓汁、渗出液、穿刺液、咽拭子标本；菌血症、败血症采集血液标本；脑膜炎采集脑脊液标本；食物中毒采集粪便、呕吐物或剩余的食物标本。;葡萄球菌属微生物鉴定技术;（四）增菌培养：

血液标本（静脉血5ml）增菌培养，增菌液（50ml）可用葡萄糖肉汤或Mg2SO4肉汤。24h培养后每日观察增菌液变化。

如无变化，需培养7d，其中盲目传代2次，如无细菌培养可报“血液标本经7d培养无菌生长”。

如发生混浊、内有胶胨样凝块等现象可进行进一步分离培

养和革兰染色。;（五）生化反应：

1．触酶试验阳性。

试管法、玻片法和平板法。

;葡萄球菌属微生物鉴定技术;（五）生化反应

4.乳胶凝集试验：如SlidexStaphPlus可快速鉴定金黄色葡萄球菌。

基本原理是在纸板或玻片上滴