植酸酶活性的测定方法.pdfVIP

以家为家，以乡为乡，以国为国，以天下为天下。——《管子》

计算机在生命科学中的运用

植酸酶的活性测定方案

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生132-2

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熊雨洁

一、基本原理

随着植酸酶的大规模应用，饲料企业如何选择和鉴别植酸酶产品，已成为使用者的

当务之急。在众多影响使用效果的因素中，产品本身的因素主要包括酶的种源、含量、温

度稳定性、容重、pH值曲线特性及体水解效率等，其中酶活含量是最重要的质量指标。

饲用植酸酶酶活性的定量分析至今没有普遍公认的检测方法,

在参考了AOAC方法的基础上采用分光光度法测定饲用植酸酶活性。

酶活性对反应条件十分敏感，测定条件和测定程序的不同对结果有极大的影响。

一个植酸酶活性单位U定义“在温度为37℃、pH值5.5的条件下，每

分钟从植酸钠浓度为5.0mmol/l植酸钠溶液中释放1μmol无机磷，

二、仪器试剂

植酸酶（Sigma公司）、钼酸铵、钒酸铵、稀硝酸、植酸钠、乙酸钠均为分析纯。

三、主要设备

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超净工作台，721型分光光度计，PHS-3TC型精密数显酸度计，80-2型离心沉淀器。

四、实验步骤

无机磷测定方法：

准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准磷酸二氢钾于100mL容量瓶中，

用乙酸缓冲液溶解，并定容至100mL，浓度为50.0mmol/L，加显色液显色，以无机磷浓度

为横坐标，吸光度值为纵坐标，在波长415nm处测定吸光度值。

植酸酶活性测定方法：

发酵液经3000r/min离心去除菌体，上清液利用截留分子量为10000U的透析

袋在去离子水中透析2h得到去除无机磷的酶液，将酶液用pH5.5的乙酸钠缓冲液稀释至合

适浓度，取1mL于37℃预热5min。然后加入2倍体积的5mmol/L植酸钠溶液，37℃恒温

反应15min后立即加入2mL颜色终止液。室温条件下静置10min后于3000r/min离心

10min。空白对照是将酶液和终止液37℃温浴15min后再加入底物植酸钠。

五、结果与讨论

1.同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性影响的试验方法

在37℃的试验条件下，改变底物植酸钠（P8810）pH，测定酶促反应的初速度。

以pH为横坐标，A为纵坐标作图

表1同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响

pH2.22.83.64.855.87.28.29.1

A171276194198110786653

图1同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响

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酶活性随P