免疫学检验-5-凝集反应.ppt

如何鉴定ABO血型？ABO血型的确认原则是什么？如何鉴定RBC上的血型抗原或血清中的血型抗体类型？采用凝集反应。第五章凝集反应

（agglutination）第一节凝集反应概述一、定义颗粒性抗原（或可溶性抗原与载体颗粒结合成致敏颗粒后）与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集块。二、发生机制分两阶段进行。特异性结合阶段抗原与相应抗体发生特异性结合。速度快，不可见。可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。抗原抗体复合物进一步交联聚集所致。受到多种因素的影响。二、发生机制分两阶段进行。特异性结合阶段抗原与相应抗体发生特异性结合。速度快，不可见。可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。抗原抗体复合物进一步交联聚集所致。受到多种因素的影响。三、影响因素抗原因素：颗粒性抗原抗原表位数目等抗体因素：来源（多克隆抗体）、亲和力、效价（含量）等。IgM的凝集作用＞IgG。不完全抗体：与相应抗原结合，但不形成可见的凝集现象。主要为小分子的IgG类抗体。IgM抗体凝集细胞示意图三、影响因素四、凝集反应的应用抗原（Ag）或抗体（Ab）的定性检测未知Ag（或Ab）＋已知Ab（或Ag）→是否出现凝集若出现凝集，则表明有相应Ag（或Ab）存在；若不出现凝集，则表明无相应Ag（或Ab）存在。抗体的半定量检测将待检标本（未知Ab）作一系列倍比稀释后加入定量抗原（已知Ag）进行反应，以出现凝集反应的最高稀释度作为Ab的效价或滴度。应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：影响因素存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集－可导致假阴性结果。非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并不对应，但存在非特异性凝集－可导致假阳性结果。应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：影响因素存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集－可导致假阴性结果。非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并不对应，但存在非特异性凝集－可导致假阳性结果。凝集反应和沉淀反应的不同点五、凝集反应的类型直接凝集反应。间接凝集反应。其他凝集技术。第二节直接凝集反应（directagglutinationtest）定义：颗粒性抗原+相应抗体→肉眼可见凝集块（细菌，RBC等）参与反应的抗原称为：凝集原（agglutinogen）；抗体称为：凝集素（agglutinin）。第二节直接凝集反应

（directagglutinationtest）常用方法：玻片法试管法微量血凝反应板法一、玻片凝集试验

（slideagglutinationtest）定性试验，常用已知Ab测定未知Ag(待检样本)。结果判读：已知Ab＋未知Ag→凝集，阳性(+)。不凝集，阴性(-)。方法评价：特异性强，简便、快速；敏感度稍低。应用：ABO血型鉴定；细菌的鉴别与分型。ABO血型鉴定结果示意图某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析造成此错误的可能原因有哪些？技术问题：责任心不强，未按要求操作；ABO标准血清质量不高：效价太低、亲和力不强，误判为阴性反应；红细胞浓度过淡或过浓：导致抗原抗体比例不适当，误判为阴性反应；各种原因引起的红细胞溶解（溶血），误判为阴性反应；操作器材不洁，红细胞被细菌污染，红细胞自凝（冷凝集）、假凝集及细菌性凝集等干扰了结果的判断，可出现假阳性。如何避免？爱岗敬业，规范操作，试剂避免细菌污染。所用器材必须干燥清洁、防止溶血。设置对照：阳性对照、阴性对照、自身对照等。某检验人员在实际工作中，出现了ABO血型的定型错误。请你分析造成此错误的可能原因有哪些？被检RBC问题：受检者红细胞上抗原位点过少，如亚型；或白血病、恶性肿瘤等导致抗原减弱，弱凝集，误判为阴性反应。由于细菌感染使红细胞出现获得性类B抗原，易误判为阳性。如何避免？用已知血型的标准红细胞检查待检血清中未知的抗体。通常采用试管法。细菌的鉴别用已知细菌诊断血清检测待检细菌方法：轻摇玻片，1～2分钟后观察结果判定：右侧为阴性对照，不凝集时结果有效若左侧出现凝集块为阳性，反之为阴性根据左侧是否出现凝集来判断待检菌的种类二、试管凝集试验

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