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蛋白质的性质实验报告

蛋白质的性质实验(一)

蛋白质的性质实验（一）

蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、目的

1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。2．了解

蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。3．学习几种常用的鉴定蛋

白质和氨基酸的方法。二、呈色反应（一）双缩脲反应1．原理

尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲

在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩

脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生

此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。双缩脲反应不仅为含

有两个以上肽键的物质所有。含有

一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—

CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以

及

一切蛋白

质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质

不一定都是蛋白质或多肽。2．试剂3．操作

取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。

熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。

冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜

溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸

铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2

mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色

的出现。

（二）茚三酮反应1．原理

除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨

基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮

吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基

酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白

质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。

该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反

应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3

和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还

原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。

此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同

pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。2．试剂3．操

作

（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液mL，再各

加0.5mL0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2分钟，

观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。

（2）在一小块滤纸上滴一滴0.5％甘氨酸溶液，风干后再在原

处滴一滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色观察紫红色斑

点的出现。（三）黄色反应1．原理

含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被

硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝

醌酸钠。反应式如下：

多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙

氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。2．试剂

（1）鸡蛋清溶液100mL

将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1∶20混匀，然后用6层纱布过滤。（2）

大豆提取液100mL

将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。（3）头发（4）

指甲

（5）0.5％苯酚溶液50mL3．操作

向7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有

的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室

温下逐滴加入10％氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。

（四）考马斯亮蓝反应1．原理

考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其

以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为

蓝色。

它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速度快，约在2分钟

左右时间达到平衡，在室温一小时内稳定。在0.01～1.0mg

蛋白质范围内，

2．试剂

（1）蛋白质溶液（鸡蛋清∶水=1∶20）5mL（2）考马斯亮蓝

染液300mL

考马斯亮蓝G250100g溶于50mL95％乙醇中，加100mL85％磷

酸混匀，配成原液。临用前取原液15mL，加蒸馏水至100mL，

用粗