甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用ppt课件.pptxVIP

甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用阿丽娅，宋有鑫，姜保国北京大学人民医院创伤骨科基金支持：国家973重大基础研究项目(2003CB515306)

背景介绍中枢神经系统损伤危害传统脊髓损伤的治疗策略组织工程再生医学概念支架材料+种子细胞（生长因子……）

支架材料的研究趋势天然支架材料人工合成不可降解支架材料人工合成生物可降解支架材料

甲壳质套管中空圆柱形套管(北京大学人民医院与中国纺织科学院共同发明，专利号2),套管尺寸:壁厚0.1mm,内径1.5mm。是一种天然高分子聚合物,学名为[(1,4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖]。甲壳质来源于天然海洋生物生物体结构物质,可被体内的酶分解而吸收,具有良好的吸湿性、纺丝性和成膜性。

生物学特性对生物体无毒性和炎症反应易于在体内降解吸收降解吸收周期适宜，可人为调控前期实验已证实“甲壳质套管能够促进损伤后的周围神经再生”

种子细胞骨髓间充质干细胞神经干细胞雪旺氏细胞嗅鞘细胞目的：初步探讨对脊髓损伤修复是否有影响甲壳质套管+骨髓间充质干细胞

defabc第三代三种形态a-cMSCs传代后的第3代；d-fMSCs的三种形态；a,dMSCs自发荧光；b,e透射光照射图像；c,f前两图的叠加效果.蓝红黄箭头：多角形，扁平不规则形，纺锤形

实验动物70只雄性SD大鼠，体重约300±25g动物模型为脊髓右侧半横断伤，随机分4组,每组20只（除正常组）正常组：10只对照组：单纯半切损伤模型，不予任何治疗；甲壳质套管治疗组：半切损伤后套管植入治疗；甲壳质套管联合MSCs组:半切损伤后套管植入,移植细胞；取材时间点:2w,4w,8w,14w,长期组（②③组）1d,5d,7d,4w,8w（④组）

脊髓半切损伤动物模型制作流程

---方法和评估指标1套管内脊髓损伤位点组织学观察1.1脊髓空洞（免疫组化---HE染色）8w时组织固定、脱水、浸蜡、包埋、切片，HE染色1.2胶质瘢痕（免疫荧光---检测星形胶质细胞，GFAP染色）2w/8w组织固定-再后固定，包埋，冰冻切片，丙酮固定后洗片封闭，分别加入抗大鼠GFAP蛋白一抗和相应二抗1.3轴突（透射电镜---2W和14W时检测超微结构）戊二醛固定，后固定，脱水包埋，切片，复染后观察

2.检测神经纤维是否穿越损伤位点2.1神经逆行性示踪：对照组、套管组分别在2周、14周于损伤位点远端注射10%BDA,多点注射，10天后取大脑和脊髓，脊髓分为近段、远段和损伤段，染色显影，阳性细胞计数2.2功能学评价：BBB功能评分；知觉功能评分，分别在术后1w，2w，4w，6w，8w，10w，12w,14w检测3.检测MSCs在套管内的生长情况：激光共聚焦显微镜观察是否增殖、迁移，分别在1d，5d，7d，4w，8w检测

二、实验结果

1脊髓损伤位点组织学观察AB套管组术中和术后大体形态观察A:建立脊髓半横断模型后套管缝合(4x)；B：6个月后损伤脊髓套管缝合的外观（4x）

1.1脊髓空洞（8W）CAB脊髓损伤位点免疫组化染色A：套管组(100x)，B：MSCs移植组(100x)；C：对照组（100x），均为8W

1.2胶质瘢痕（2W）脊髓半横断后星形胶质细胞形态的变化A，B套管联合干细胞组脊髓损伤近远端的星形胶质细胞形态；C，D对照组脊髓损伤近远端星形胶质细胞的形态，均为400xABCD套管联合干细胞组对照组套管联合干细胞组对照组近端远端

1.3脊髓内部超微结构---轴突ABCDE髓鞘在不同时间点形态（10000x）A：正常轴突；B：2W时套管干细胞组轴突；C：2W时对照组轴突;D:14W时套管干细胞组轴突;E:14W时对照组轴突

2检测神经纤维穿越损伤位点ABC神经逆行示踪阳性细胞及神经纤维A：正常大鼠大脑，400x;B：14w时套管干细胞组大脑，400x;C:14w时套管干细胞组脊髓神经纤维，100x2.1