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紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12注射液

【实验内容】

1.对照品溶液和样品溶液的配制

准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。

精密吸取维生素B12注射液0.5ml于10ml容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，

得到待测

样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml的溶液）。

2.吸收光谱的绘制与注射液的鉴别

取对照品溶液进行光谱扫描（250~600nm），得到维生素B12的吸收曲线，

寻找吸收峰，

扫描后可得到在278nm，361nm和550nm波长处出现的3个吸收峰，然后

在以上3个吸

收峰处测量维生素B12注射液的吸光度，并计算A361/A278和A361/A550的

比值。

3.维生素B12的定量测定

根据吸收曲线选择最大吸收波长（在361nm或附近）作为测量波长，测量维

生素B12

【注意事项】

1.注意石英比色皿的操作使用；

2.使用5联池时要注意比色皿在样品池中的位置，不可混淆；

3.测定时不要打开仪器的样品池盖。

【数据记录】

WLABS

550.50.142

550.00.141

361.00.450

278.00.248

277.50.249

【数据处理】

1、定性分析

E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81

E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.17

2、定量分析

因为，A(361nm)=E(1%1cm)cl，g/100ml=106μg/100ml=104μg/ml

所以，

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cB12=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*10=0.450/207*10=21.74μg/ml

Vit=(c*n)/(500μg/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n

B12(%)B12

为稀释倍数)

【思考题】

1．采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求？

2．利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的

形状、

吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。

利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度

的吸光度有无不同，试作解释。

答：不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致，能反映出同一物质的基本特征，但吸收曲线的吸光度和吸收

峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须

对仪器进行定期的校正。

3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？

吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因

此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。

校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于

测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正