免疫细胞功能测定.pptVIP

趋化01吞噬02胞内杀灭作用03吞噬细胞的功能：细胞趋化功能的检测01吞噬和杀菌功能的检测02一、中性粒细胞功能的检测(一)细胞运动功能——趋化功能检测原理：第一节淋巴细胞的功能检测一、T细胞功能检测二、B细胞功能检测三、NK细胞活性测定第十五章免疫细胞功能检测技术第二节吞噬细胞功能检测技术一、中性粒细胞功能检测二、巨噬细胞功能检测第三节免疫细胞功能检测的临床应用思考题小结对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等功能测定可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定010203T细胞（负责细胞免疫功能）B细胞（执行体液免疫功能）NK和K细胞（非特异性免疫作用）淋巴细胞一、T细胞功能的检测T细胞增殖试验T细胞分泌功能测定T细胞介导的细胞毒试验体内试验原理：01.淋巴细胞01.DNA合成01.分化01.母细胞01.刺激物01.细胞变大01.细胞浆扩大01.空泡01.核仁明显01.核染色质疏松01.（一）T淋巴细胞增殖试验未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无PHA------T细胞01非特异性刺激物：03异种抗原同种组织抗原特异性刺激物：02PWM-------T、B细胞LPS-------B细胞ConA-------T细胞2.淋巴细胞转化的刺激物检测方法形态法：刺激物淋巴细胞（4-6天）母细胞化同位素法：PHA淋巴细胞（54h）DNA合成期+3HTdR掺入收集细胞测定细胞内的3H－TdR（1）形态学检查法缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。方法学评价：优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。（2）3H-TdR掺入法(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。01原理：02靶细胞抗原03T细胞04观察杀伤活力05致敏CTL06靶细胞（三）T细胞介导的细胞毒试验形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞同位素法：淋巴细胞（CTL）+含51Cr的肿瘤细胞肿瘤细胞破坏51Cr释放测定γ射线意义：肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力2.方法图15-2T细胞细胞毒试验示意图特异性抗原皮肤试验PHA皮肤试验(四)体内试验B细胞增殖能力的试验溶血空斑试验B细胞抗体形成功能的检测体内试验二、B细胞功能检测B细胞增殖形态学细菌脂多糖SAC的SPA 3H－TdR掺入法抗IgM(一)B细胞增殖能力的试验(二)溶血空斑试验原理：2.方法学：经典溶血空斑形成试验被动溶血空斑试验评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响3．临床应用与评价(三)B细胞抗体形成功能的检测

——酶联免疫斑点法原理：该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。优点：稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。2．应用与方法学评价：体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。(四)体