ABO、RhD血型鉴定_原创精品文档.pdfVIP

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

ABO、RhD血型鉴定操作规程

一、目的

指导规范本科工作人员进行血液ABO、RhD血型鉴定工作。

二、适用范围

输血岗位工作人员。

三、职责

负责对申请输血的标本进行ABO、RhD血型鉴定。

四、标本

2mlEDTA-K2抗凝全血。

五、实验器材

载玻片、0.5~10ul加样枪、20~200ul加样枪、100~1000ul加样枪、一次性

吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。

六、实验试剂

抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗体），RhD（IgM）血型定型试剂（单

克隆抗体）；0.5%~1%A、B标准红细胞盐水悬液；ABO、RhD血型定型检

测卡；0.9%生理盐水。

七、检测原理

血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合，

能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性抗-A、抗-B和RhD标准血

清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准A

红细胞和B红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然IgM类抗-A

或抗-B。

微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相应

抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过

凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细

胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微

柱腔底部。

八、操作流程

1、玻片法

1.1查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好A、B、Rh，分别向所标注位

置加5ul待检全血，再向相应位置滴加抗-A、抗-B、RhD标准血清一滴，混

匀。

1.2查抗体：台式离心机3000r/min离心待检标本2min，上清备用。取洁净载

玻片一张，记号笔标注Ac、Bc，相应加入A型、B型标准红细胞一滴，再分

别加入待检血浆（清）20ul，混匀。

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

1.3将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续15min，肉眼观察有

无凝集反应。如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。

2、微胶凝柱法

2.1标本准备：待检全血3000r/min离心2min，上清液为待检血浆；取压积红细

胞10ul加入1000ul生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。

2.2标注微柱凝胶卡（受检者信息及检测时间）。

2.3将备好的待检红细胞悬液分别加入前4支微柱腔（抗-A、抗-B、RhD、对照），

每孔50ul。

2.4将待检血清（浆）分别加入后两支微柱凝胶腔中（中性），每孔50ul。

2.5将已知A型和B型红细胞0.5%~1.0%浓度悬液50ul分别加入第五和第六支微

管中。

2.6即刻用专用微柱凝胶离心机离心5min，取出肉眼观察，判定结果。

2.7结果判定：阴性不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱底部；阳性

出现特异性抗原抗体复合物，红细胞浮在凝胶表面或胶中。

九、ABO、RhD标准