仪器分析第四版第三章.ppt

2．固定相：与LC比，固定相粒径不同（10μm）（1）硅胶表孔硅胶（薄壳硅胶）全多孔硅胶无定形5~6μm球形3~4μm堆积硅珠3~4μm硅胶吸水量↑，LSC→LLC硅胶含水量较小吸附色谱硅胶极性较大硅胶含水量17%分配色谱硅胶失活→载体吸附的水→固定液原理：吸附特点：峰易拖尾适用：分离极性化合物标题01原理：吸附+分配02兼小孔凝胶作用04适用：分离弱极性化合物03特点：柱选择性好，峰形好，柱效低（2）高分子多孔小球：3．流动相：各种不同极性的一元或二元溶剂底剂（烷烃）+有机极性调节剂例：正己烷或庚烷+氯仿---4．出柱顺序：强吸附组分后出柱，弱吸附组分先出柱5．影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关溶质分子吸附性、极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑溶剂系统吸附性、极性↑，洗脱能力↑，k↓，tR↓注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间二、液液分配色谱法（LLC）1．分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异2．正相色谱——固定液极性流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分反相色谱——固定液极性流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分3．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺点：系统内部压力大，易流失，不实用利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面特点：表面没有液坑，传质快不易流失，寿命长热稳定性好化学性能好载样量大可键合不同官能团，选择性灵活适于梯度洗脱124、化学键合固定相（一）正相键合相色谱1．分离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力2.固定相：极性大的氰基或氨基键合相3．流动相：极性小底剂+有机极性调节剂例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇4．流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱6．适用：分析极性大物质、糖类等（二）反相键合相色谱1．固定相：极性小的烷基键合相C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC约80%问题）2．流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水流动相极性固定相极性底剂+有机调节剂（极性调节剂）例：水+甲醇，乙腈，THF3．流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑4．出柱顺序：极性大的组分先出柱极性小的组分后出柱5．适用：非极性~中等极性组分三、离子色谱法（IC）1．离子对色谱法（IPC）将一种或多种与溶质分子电荷相反的离子加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合成疏水型离子对化合物，在两相间分配KXY=[X+Y-]有机相[X+]水相?[Y-]水相溶质的分配系数为DX=[X+Y-]有机相[X+]水相=KXY?[Y-]水相高效液相色谱法：特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：150-350*105Pa高速：迅速高效：大于30000塔板/米高灵敏：10-9g（紫外检测）、10-11g（荧光检测）第三章高效液相色谱分析法HPLC§3-1高效液相色谱法的特点HPLC与GC差别1．分析对象的区别GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热