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药用石斛杂交育种技术规程

1范围

本标准规定了药用石斛杂交育种亲本的选择与栽培、杂交技术、F1代无菌苗的生产、子代测定、优良单株扩繁以及谱系档案管理等内容。

本标准适用于人工控制下的药用石斛杂交育种。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/TLY/TLY/T

2758-2015

2449-2015

2675-2016

植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南石斛属

霍山石斛种苗繁育技术规程

石斛种质鉴定技术规范LY/T

2698-2016铁皮石斛杂交育种技术规程LY/T

2820-2017齿瓣石斛培育技术规程

DB44/T1304.3-2014无公害农产品铁皮石斛第3部分：生产技术规程GB/T8321（所有部分）

农药合理使用准则中华人民共和国药典(2020版一部)

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1药用石斛MedicinalDendrobium

是指中华人民共和国药典(2020版一部)收录的、其新鲜或干燥茎可做药材使用的石斛属植物，包括铁皮石斛DendrobiumoficinaleKimuraetMigo，金钗石斛DendrobiumnobileLindl.，霍山石斛DendrobiumhuoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng，鼓槌石斛DendrobiumchrysotoxumLindl.，流苏石斛DendrobiumfimbriatumHook.及其同属植物近似种。

3.2柱头窝stigmanest

药用石斛合蕊柱柱头中间凹陷的部位。

3.3茎粗值stemdiameter

是指介于药用石斛枝条顶芽与其茎基部之间中间部位茎的直径值。

4亲本选择与培育

4.1亲本的选择

应选择多糖含量高于35%、抗逆能力强、生长势好、萌蘖能力强的优良品种作为父母本。

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4.2亲本栽培

亲本宜种植于标准钢架大棚或简易大棚内，大棚宜高3m～4m,宽6m～8m，长度视地形而定。棚内需通风良好，并设有遮荫网、防虫网和塑料膜。苗床距离地面宜高度15cm～80cm，宽100cm～180cm，长度根据大棚情况而定，上铺栽培基质，厚度宜10～25cm。床间通道宽50cm～60cm。其余栽培及管理事项参照DB44/T1304.3-2014执行。

5杂交技术

5.1花粉采集

药用石斛开花时间为每年4月至6月，在父本即将开放前的早晨选择无露珠的花朵采集花粉。采集前准备洁净干燥的玻璃瓶、镊子和取样针备用，采集时一只手小心将花朵唇瓣朝上，另一只手去除唇瓣，

然后用镊子小心朝唇瓣方向去掉药帽，用灭菌牙签顶端放到药室内轻轻将花粉粒粘起，送人准备好的授粉花朵或者干燥瓶内。

5.2花粉保存

将装有花粉的干燥瓶密封，并在4℃冰箱保存，存放时间不超过10d。

5.3授粉

授粉时间选择在母本开花第2d～5d内进行。授粉前将取样针或牙签高温消毒备用，授粉时用取样针顶端将花粉粒粘起，送至母本柱头窝内。同一支取样针只能给一朵花授粉，更换父母本时都需要更换取样针。

5.4标记

授粉后及时挂牌做好标记和记录。

5.5授粉后管理

授粉后子房开始膨大时疏果，每株保留果实2个～3个。管理事项参照4.2执行。

5.6蒴果采收与保存

5.6.1蒴果采收

杂交后8个～9个月，当蒴果表皮由绿色转为黄色且尚未开裂时带柄采集。

5.6.2蒴果保存

采集后的蒴果放罝在4℃冰箱保存备用。

6F1代无菌苗培育

6.1材料灭菌

先用软毛刷将药用石斛蒴果表面在清水中清洗干净，在1%洗衣粉液或1%洗洁精中振动浸泡10min，清水冲洗30min。然后，在超净工作台上，用75％酒精冲洗蒴果表面1次，再置于0.1%HgCl2溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗4次。。

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6.2培养基制备

种子萌发培养基采用1/2MS培养基，添加NAA0.5mg/L,蔗糖3%,琼脂0.7%,pH5.4～5.8。

6.3无菌播种

将消毒后蒴果置于无菌的培养皿中，接着用镊子夹起蒴果，无菌滤纸吸干表面水分后，镊住果柄一端，用解剖剪轻轻在蒴果顶端剪开一小口，对准组培瓶口轻轻悬空抖动镊子，将种子均匀地播于种子萌发培养基上。

6.4培养条件

接种后的培养基置于温度（25±2）℃、光照强度1000lx～2000lx、光照时间8h～12h/d的培养室培养。

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