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乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)

1原理:

在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标

记抗体(HbsAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人

血清(或血浆)中乙肝表面抗原(HBsAg)。

2试剂:

2、1试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)

2、2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司

2、3包装规格:96Test/Kit

2、4试剂盒组成:HbsAb预包被微孔板(包被HbsAb),HbsAg

酶标抗体(含HRP标记HbsAb),HbsAg阳性对照(含基因工程H

bsAg),HbsAg阴性对照(正常人血清),HbsAg样品稀释液(含BSA

缓冲液),浓缩洗涤液(PBS-T缓冲液),底物A(含H2O2),底物B(含T

MB),终止液(含H2SO4),封板膜,自封袋,说明书。

2、5试剂储存条件及有效期:2~8℃避光保存,有效12个月。

3样本采集:

取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及

时测定可臵于4℃冰箱保存,如长期保存需臵于-15至-20℃冻存,

并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响

试验结果的准确性,建议不使用。

4所需仪器

4、1全自动酶免分析仪

4、2新鲜蒸馏水或去离子水

4、3酶标仪(单波长450nm或双波长450nm/630nm)

4、4微量移液器

4、537℃恒温箱或水浴箱

4、6洗板机或洗瓶

5检验方法

5、1平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温(18~25℃),

微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。

5、2配液:浓缩洗涤液配臵前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),

浓缩洗涤液与蒸馏水去离子水按1:19稀释后使用。

5、3编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。

5、4稀释:每孔加入20ul样品稀释液。

5、5加样:分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待

测样本。

5、6温育:臵37℃温育60min。

5、7加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。

5、8温育:臵37℃温育30min。

5、9洗涤:用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干(每次应保持3

0~60s的浸泡时间)。

5、10显色:每孔加入底物A、B各50ul,轻拍混匀,37℃暗臵3

0min。

5、11终止:每孔加入终止液50ul,混匀。

5、12测定:用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630n

m测定各孔OD值(用单波长测定时,需用空白对照调零),并记录结

果。

6结果判定与分析

临界值(C、O、)的计算:临界值=阴性对照孔OD平均值*2、1;

阴性对照OD均值小于0、05时以0、05计算。

结果判定:样本OD值S/C、O、=1者为HbsAg阳性样本O

D值S/C、O、1者为HbsAg阴性

阴性对照均值0、1或阳性对照均值0、4时,实验无效,应重

新试验。

7质量控制

每次试验用HBsAg的质控血清同步检测,S/CO值应在控制范

围内;如失控,检查试剂校期、储藏温度、试验温度就是否正常、操

作步骤就是否正确,直至从新试验使其在控。

8参考范围阴性

9临床意义

在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或

为无症状携带者。