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细胞工程复习提纲（填空、判断）

一、填空题

体外培养主要包括器官培养、组织培养、细胞培养三种类型。

Harrison的实验开创了动物组织和细胞培养的先河，他建立了卡氏瓶培养法。

在卡氏瓶原理的启发下出现了用试管培养，继而又出现了多种类型的单盖片、培养皿和盖玻

片的培养。从20世纪40年代开始，大多数培养工作都过度用培养皿培养。

在动物细胞培养方法的发展中，具有历史意义的培养方法由盖玻片悬滴培养法、卡氏瓶培养

法、灌注小试管培养法和目前普遍应用的单层细胞培养法。

早期细胞培养采用天然培养基，现在广泛采用添加血清的人工合成培养基，近二十年来，动

物细胞培养基朝着无血清培养基的方向发展。

体外培养的动物细胞其生长方式主要有贴壁细胞和悬浮细胞两种。分别称为贴壁型细胞和悬

浮形细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以贴壁为主。

贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细

胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。

细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

培养细胞生命期可分为原代、传代、衰退三个阶段。

根据动物细胞的培养特性不同，可采用悬浮培养、贴壁培养和固体化培养等三种方法进行

动物细胞大规模培养

在动物细胞大规模培养中，能为细胞提供贴附表面基质目的主要有旋转瓶、中空纤维、细

胞工厂和微载体等。

制备固定化细胞的方法很多，在动物细胞培养中要考虑使用较温和的固定化方法，如吸附法、

包埋培养法和微囊化培养。

无论培养何种细胞，就操作方面而言，深层培养可分为分批法、流加式、半连续式、连续式

和灌流式五种发酵工艺。

针对动物细胞培养特性开发的搅拌式生物反应器，主要有笼式通气搅拌反应器、双层笼式通

气搅拌反应器等。

用气流代替不锈钢叶片进行搅拌，因而产生的剪切力相对温和，对细胞损伤很小的生物反应

器是中空纤维生物反应器

为了促进上皮细胞的生长，需要从表皮分离、培养液和基质选择、增减适当的生长因子等方

面抑制成纤维细胞生长。

上皮细胞培养器皿生物表面需包被生长基质如胶原等

在上皮细胞的实际培养中，常将DMEM和HamF12培养基按比例混合使用。

用于内皮细胞培养的标本多为鼠脑皮质毛细血管、牛主动脉、牛肾上腺皮质毛细血管、人

脐静脉以及人皮肤和脂肪的毛细血管。

神经元细胞的培养底物需要经过胶原或聚L-赖氨酸的特殊处理

阿糖胞苷可以预防非神经元细胞的生长，用于神经元细胞的纯化。

肿瘤细胞培养过程中常用的促细胞生长因子有表皮生长因子、胰岛素、转铁蛋白。

神经胶质细胞主要取材部位为幼年或成年动物或人的脑组织标本。

神经组织的体外培养主要包括神经元和神经胶质细胞的培养

永生性也称不死性，即在体外培养中细胞表现为可无限传代而不凋亡。

侵略性是肿瘤细胞的扩张性繁殖行为。体外培养的癌细胞仍持有这种性状。

制备单克隆抗体的融合是指将免疫小鼠的脾细胞和骨髓细胞融合。

融合过程中使用的促溶剂主要是PEG

第一个单克隆抗体是1975年制备成功的。

单克隆抗体的大量制备普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。

常用的细胞转染方法有磷酸钙转染法、脂质体转染法、DETE-葡聚糖转染法。

杂交瘤细胞克隆化的方法很多，常用的包括有限稀释法和软琼脂平板法。

在细胞融合过程中瘤细胞株应用做的的是脾细胞株。

细胞融合培养时加入HAT选择系统，目的是保证只有杂交瘤细胞生长。

外植体经自来水冲洗后应进行消毒液溶液浸泡、无菌水冲洗三步，完成灭菌过程。

植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性。

1943年，White正式提出植物细胞全能性理论，认为每个植物细胞都具有母株植物的全套遗

传信息，具有发育成完整植株的能力。

植物生长点附近的病毒浓度很低或无病毒，利用愈伤组织培养可脱去病毒，获得脱毒植株。

用于外植体表面灭菌的灭菌剂主要有酒精、双氧水、漂白粉等。

培养基pH一般调节为pH5.5~5.8，常用NaOH和HCl方法来进行

磷是构成核酸的主要成分，这种物质又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。磷也是蛋白质的

成分，这是一种常见的直接能量物质。

微量元素母液可配成100倍，配置培养基时移取1000ml

高压灭菌可以对培养基及玻璃器皿、枪头、无菌水等进行灭菌。

请列出外植体常用的五种消毒剂：次氯酸钠、次氯酸钙、漂白粉、酒精、溴水

愈伤组织的