浙江专版2024_2025学年高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1.docVIP

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试验一大肠杆菌的培育和分别

1.培育基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等养分物质。2

1.培育基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等养分物质。

2..本试验用LB液体培育基扩大培育大肠杆菌，用LB固体培育基分别大肠杆菌。

3.消毒是指运用较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；而灭菌是指运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。

4..试验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌及过滤灭菌等。

5.固体培育基的配制过程为：

计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。

6.微生物分别接种最常用的方法是划线分别法和涂布分别法。

一、微生物

1．概念：微生物是结构简洁、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。

2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。

二、培育基

1．概念

人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质。

2．养分构成

各种培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满意微生物生长对pH、特殊养分物质以及氧气的要求。

3．培育基的类型

(1)按物理性质分：固体培育基、半固体培育基、液体培育基。

(2)按目的用途分：鉴别培育基、选择培育基。

4．微生物生长对特殊养分物质的要求

(1)细菌培育基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置，细菌喜荤。

(2)霉菌培育基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可，霉菌喜素。

5．微生物生长对pH的要求

细菌要求在中性偏碱(6.5～7.5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸(5.0～6.0)的环境中生长。

三、无菌技术

1．获得纯净培育物的方法

获得纯净培育物的关键是防止外来杂菌的入侵，详细操作如下：

(1)对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

(2)将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等进行灭菌。

(3)为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在酒精灯火焰旁边进行。

(4)试验操作时应避开已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触。

2．消毒和灭菌

(1)概念：[填表]

项目

方法

结果

常用的方法

消毒

较为温柔的物理或化学方法

仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)

煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法

灭菌

剧烈的理化因素

杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌

(2)常用方法：[连线]

四、分别细菌的两种方法比较

项目

划线分别法

涂布分别法

工具

接种环

玻璃刮刀

原理

划线过程中接种环上的菌液渐渐削减，到划线最终部分细菌间距离加大，经培育后能得到单菌落

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，进行培育。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培育基表面形成单个的菌落

特点

方法简洁，但单菌落较难分开

单菌落更易分开，但操作困难些

目的

使培育基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落

五、大肠杆菌的培育与分别

1．大肠杆菌

(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。

(2)繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。

2．扩大培育与分别

扩大培育用LB液体培育基，划线分别用LB固体平面培育基。

3．大肠杆菌分别过程

(1)培育基灭菌：50mLLB液体培育基和50mLLB固体培育基及培育皿运用高压蒸汽灭菌。

(2)倒平板：将培育基分别倒入4个灭菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面。

(3)接种：在装有液体培育基的三角瓶中接种大肠杆菌，在每分钟200转的摇床上振荡培育12h。

(4)划线分别：用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培育基的平板上连续划线，盖好培育皿。培育皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培育箱中培育12～24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落。

(5)培育视察：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培育24h后，置于4℃冰箱中保存。

1．下列操作错误的是()

A．用酒精擦拭双手

B．用氯气消毒水源

C．试验操作应在酒精灯火焰旁边进行

D．玻璃器皿(吸管、培育皿)用酒精擦拭灭菌

解析：选D对玻璃器皿一般应进行干热灭菌，而不是用酒精擦拭消毒。

2．下列有关涂布分别法的叙述，错误的是()

A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释

B．将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面

C．在相宜条件下培育

D．都可在培育基表面形成单个的菌落

解析：选D涂布分别法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，在相