糖化酶研究综述.pdfVIP

糖化酶又称葡萄糖淀粉酶[Glucoamylase,(EC.3.2.1.3.)],是淀粉分解酶的

的一个分支。糖化酶是一种习惯上的名称,学名为α-1,4-葡萄糖水解酶

(α-1,4-Glucanglucohydrolace)。它能把淀粉从非还原性未端水介a-1.4葡萄

糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。

糖化酶是由曲霉优良菌种（Aspergilusniger）经深层发酵提炼而成。（深

层发酵是利用深层培养基的厌氧环境来培养厌氧细菌，但不能培养严格厌氧细菌,

多用于兼性厌氧菌和微耗氧菌的培养）

重要糖化酶生产菌有：雪白根霉，德氏根霉，河内根霉，爪哇根霉，台湾根

霉，臭曲霉，黑曲霉等。

糖化酶用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素

的发酵；本品还大量用于生产各种规格的葡萄糖。总之，凡对淀粉、糊精必需进

行酶水解的工业上，都可适用。最多应用于酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、柠

檬酸、啤酒等工业以及白酒、黄酒。

一特性：

1.作用方式：糖化酶的底物专一性较低，它除了能从淀粉链的非还原性

未端切开a-1.4键处，也能缓慢切开a-1.6。因此，它能很快的把直链淀粉从非

还原性未端依次切下葡萄单位，在遇到1.6键分割，先将a-1.6键分割，再将

a-1.4键分割，从而使支链淀粉水解成葡萄糖

2.作用条件：糖化酶随作用的温度升高活力增大，超过65℃又随温度升高

而活力急剧下降，本品是最适作用温度是60-62℃。最适作用PH舒值在4.0-4.5

左右

3．活力检测：

酶活力定义：1克酶粉或1毫升酶液在40℃，PH4.6条件下，1小时水解可溶

性淀粉产生1毫克葡萄糖的酶量为1个酶活力单位（U）。

原理：糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分

解α-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，

过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。

试剂和溶液：

（1）乙酸－乙酸钠缓冲溶液（pH为4.6）。称取乙酸钠（CH3COONa·3H2O）

6.7g，溶于水中，加冰乙酸（CH3COOH）2.6ml，用水定容至1000ml。

配好后用pH计校正。

（2）硫代硫酸钠标准溶液（Na2S2O3，0.05mol/L）。

（3）碘溶液（1/2I2，0.1mol/L）。

（4）氢氧化钠溶液（NaOH，0.1mol/L）。

（5）200g/L可溶性氢氧化钠溶液。

（6）硫酸溶液（2mol/L）。

（7）20g/L可溶性淀粉溶液。

（8）10g/L淀粉指示液。

仪器和设备：

恒温水浴锅、秒表、比色管、玻璃仪器。

.步骤：

（1）待测酶液的制备称取酶粉1～2g，精确至0.0002g（或吸取液体酶1.00ml），

先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中。沉

渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3～4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲

液定容至刻度（估计酶活力在100～250u/ml范围内），摇匀。通过4层纱布过

滤，滤液供测定用。

（2）测定于甲、乙两支50ml比色管中，分别加入可溶性淀粉25ml及缓冲液

5ml，摇匀后，于40℃恒温水浴中预热5min。在甲管（样品）中加入待测酶液

2ml，立刻摇匀，在此温度下准确反应30min，立刻各加入氢氧化钠溶液0.2ml，

摇匀，将两管取出迅速冷却，并于乙管（空白）中补加待测酶液2ml，吸取上述

反应液与空白液5ml，分别置于碘量瓶中，准确加入碘溶液10ml，再加氢氧化

钠溶液15ml，摇匀，密塞，于暗处反应15min。取出，加硫酸溶液2ml，立即

用硫代硫酸钠标准溶液滴定，直至蓝色刚好消失为其终点。

计算：

X＝（A－B）c×90.05×32.2/5×1/2×n×2＝579.9×（A－B）c×n

式中X——样品的酶活力（u/g或u