2025届高三生物一轮复习练习 基因工程（综合） Word版.docx

高三生物第一轮复习学历案67

基因工程（综合）

【要点自测】

1.（2023湖北卷）用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（）

??

A．若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同

B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因

C．若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否

D．若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落

2.（2023山西卷）某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（????）

A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA连接酶连接

B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接

C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接

D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接

3．下图为PCR获取并扩增目的基因的示意图，引物的3′端有结合模板DNA的关键碱基，5′端碱基无严格限制。据图回答下列问题：

(1)PCR的原理是____________________，PCR过程中所用的酶是_________________________。

(2)PCR的每次循环一般包括三步，其中所需温度最低的步骤是___________________。在PCR过程中，新合成的DNA子链的延伸方向是_________________（3′端→5′端或5′端→3′端）。

(3)PCR获取目的基因时，引物的作用是__________________________________。为了方便目的基因与质粒的连接，可在引物的________端添加限制酶识别序列。

(4)科学设计引物是PCR能否成功的关键。若引物的碱基太少，会使得引物_____________，导致扩增的产物有多种。若引物的碱基过多或引物的G、C含量过高，会造成PCR的效率偏低，收获的目的基因较少，原因是_____________________________________________。

4.（2023浙江卷）赖氨酸是人体不能合成的必需氨基酸，而人类主要食物中的赖氨酸含量很低，利用生物技术可提高食物中赖氨酸含量。回答下列问题：

(1)植物细胞合成的赖氨酸达到一定浓度时，能抑制合成过程中两种关键酶的活性，导致赖氨酸含量维持在一定浓度水平，这种调节方式属于。根据这种调节方式，在培养基中添加，用于筛选经人工诱变的植物悬浮细胞，可得到抗赖氨酸类似物的细胞突变体，通过培养获得再生植株。

(2)随着转基因技术与动物细胞工程结合和发展，2011年我国首次利用转基因和体细胞核移植技术成功培育了高产赖氨酸转基因克隆奶牛。其基本流程为：

①构建乳腺专一表达载体。随着测序技术的发展，为获取富含赖氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通过检索获取其编码序列，用化学合成法制备得到。再将获得的目的基因与含有乳腺特异性启动子的相应载体连接，构建出乳腺专一表达载体。

②表达载体转入牛胚胎成纤维细胞（BEF）。将表达载体包裹到磷脂等构成的脂质体内，与BEF膜发生，表达载体最终进入细胞核，发生转化。

③核移植。将转基因的BEF作为核供体细胞，从牛卵巢获取卵母细胞，经体外培养及去核后作为。将两种细胞进行电融合，电融合的作用除了促进细胞融合，同时起到了重组细胞发育的作用。

④重组细胞的体外培养及胚胎移植。重组细胞体外培养至，植入代孕母牛子宫角，直至小牛出生。

⑤检测。DNA水平检测：利用PCR技术，以非转基因牛耳组织细胞作为阴性对照，以为阳性对照，检测到转基因牛耳组织细胞中存在目的基因。RNA水平检测：从非转基因牛乳汁中的脱落细胞、转基因牛乳汁中的脱落细胞和转基因牛耳组织细胞，提取总RNA，对总RNA进

行处理，以去除DNA污染，再经逆转录形成cDNA，并以此为，利用特定引物扩增目的基因片段。结果显示目的基因在转基因牛乳汁中的脱落细胞内表达，而不在牛耳组织细胞内表达，原因是什么？