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犬利什曼病诊断技术规范

1范围

本文件规定了犬利什曼病的诊断依据、诊断原则、诊断标准和鉴别诊断。

本文件适用于对犬利什曼病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB15986黑热病诊断标准及处理原则

WS258黑热病诊断标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

无鞭毛体amastigote

利什曼原虫寄生于人和犬巨噬细胞内、无运动能力的生活阶段，虫体呈卵圆形，鞭毛不伸出体外。

3.2

前鞭毛体promastigote

利什曼原虫寄生于白蛉消化道内或在培养基内的生活阶段，虫体呈梭形，较无鞭毛体大，鞭毛自虫体前端伸出，具有运动能力。

4诊断依据

4.1流行病学

生活在利什曼病流行区内，或在白蛉季节内（5~9月）曾进入流行区的犬只。

4.2临床表现

患犬出现皮肤结痂或溃疡、局部或广泛性淋巴结增大、发热、体重下降、食欲下降、运动不耐受、脾脏增大、鼻衄、眼部病变等。患犬也可不出现临床症状。

4.3实验室检查

4.3.1全血细胞计数

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患犬可出现贫血、白细胞增多或减少、血小板减少。

4.3.2血清生化

典型的生化异常为高蛋白血症、高球蛋白血症、低白蛋白血症和低白蛋白/球蛋白。根据器官受累的情况，还可能出现氮质血症、丙氨酸氨基转移酶和碱性磷酸酶等肝脏漏出酶或胆汁淤积酶的升高。

4.3.3血清蛋白电泳

多克隆的β球蛋白和γ球蛋白升高，也可出现单克隆γ球蛋白升高。

4.3.4细胞学检查

来源于皮肤、淋巴结、脾脏或骨髓等部位的细胞学涂片上观察到利什曼原虫无鞭毛体。细胞学样本采集见附录A。

4.3.5组织病理学检查

从皮肤、淋巴结、脾脏或骨髓等部位采集的组织切片中观察到利什曼原虫无鞭毛体。

4.3.6血清学检查

用间接荧光抗体试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫色谱法等方法检测患犬外周血中的循环抗体，检测结果为阳性。犬利什曼病的血清学检查见GB15986-1995附录B或WS258-2006附录B。

4.3.7核酸检测

利什曼原虫核酸用聚合酶链式反应（PCR）检测呈阳性，推荐方法参见附录B。

5诊断原则

根据患犬流行病学、临床表现和实验室结果进行综合判断，病例确诊需要实验室证据。

6诊断标准

6.1疑似病例

符合4.1、4.2.、4.3.2和4.3.3。

6.2临床诊断病例

疑似病例同时符合4.3.6。

6.3确诊病例

临床诊断病例同时符合4.3.4、4.3.5和4.3.7中至少一条。

7鉴别诊断

犬利士曼病应与犬埃利希体病、钩端螺旋体病、组织细胞增多症、皮肤淋巴瘤、肥大细胞瘤、蠕形螨等相鉴别。

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附录A

（规范性）

细胞学样本采集和制备方法

A.1准备工作

A.1.1材料准备

晾片板、载玻片、6~12mL注射器、20~23G针头、钝手术刀片、电推剪。

A.1.2操作人员准备

核对病例及病变信息后，将6~10张载玻片平摊在晾片板上备用，将注射器和针头连接备用。

A.1.3动物准备

根据采样部位选择保定姿势对动物进行保定；若动物不配合或待采样部位操作受限，可对动物镇静或麻醉后进行采样。采样部位剃毛，酒精棉消毒。

A.2样本采集和涂片制备

A.2.1皮肤样本

皮肤病变可采用刮片法进行。用钝手术刀片垂直于皮肤病变表面刮取数次，将刀片上获得的样本涂抹至载玻片上。

A.2.2淋巴结和脾脏样本

淋巴结和脾脏样本宜在超声引导下采用非负压式细针抽吸法进行：

a)超声确定穿刺部位后对待穿刺处皮肤进行术前消毒。

b)左手固定病变或进针位置。

c)右手持连接针头的注射器，不向注射器施加负压。

d)保持针头在病变内，将针头朝不同方向来回移动8~10次，或在针头中观察到样本即可停止。

e)拔出针头和注射器，用干棉球按压进针位置。

f)分离针头和注射器，将注射器抽入空气后，再次连接针头和注射器，推动针栓，将注射器内样本转移至载玻片上。

g)若载玻片上的样本较多，可另取一张载玻片，十字交叉置于前一载玻片和样本之上，待样本完全散开之前，水平移动第二张载玻片，细胞学样本即可均匀而分散地分布于载玻片表面。

h)若载玻片上的样本较少，可用注射器针尖将样本沿多个方向划拨。

A.3涂片染色

A.3.1准备材料

瑞氏-姬姆萨染液、磷酸盐缓冲液、洗耳球、染色架、计时器、吸水纸、去离子水或蒸馏水。

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A.3.2操作步骤

瑞氏-姬姆萨染