DB12T 863-2019 水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程　.docxVIP

ICS65.020.30B44

DB12

天津市地方标准

DB12/T863—2019

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程

Aquaticprobiotics---TechnicalregulationforproductionofBacillusamyloliquefaciens

2019-01-14发布2019-02-15实施天津市市场监督管理委员会发布

I

DB12/T863—2019

前言

本标准依据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。

本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。

1

DB12/T863—2019

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程

1范围

本标准规定了解淀粉芽胞杆菌生产中所涉及的生产环境和设备、生产技术流程、质量检测和储运。本标准适用于水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB3095环境空气质量标准

GB3838地表水环境质量标准GB20287农用微生物菌剂

GB/T26428饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

解淀粉芽胞杆菌bacillusamyloliquefaciens

属于芽胞杆菌科，芽胞杆菌属，杆状，有鞭毛，革兰氏阳性菌，芽胞椭圆形，中生或近中生。

3.2

原菌种theoriginalstrain

由单菌落分离纯化，并在固体斜面上繁殖保存的菌种。

3.3

一级菌种firstclassstrain

原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至三角瓶中，振荡培养的菌种。

3.4

二级菌种secondclassstrain

三角瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中放大培养的菌种。

4生产环境和设备要求

4.1生产环境

4.1.1厂区空气质量符合大气环境质量标准GB3095中Ⅱ类要求。

4.1.2发酵用水符合地表水环境质量标准GB3838中Ⅲ类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中IV类水质要求。

4.1.3生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间与生产车间分开。

2

DB12/T863—2019

4.2生产设备

生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。

5生产技术流程

5.1生产流程

生产技术流程见附录A

5.2菌种质量

5.2.1用于发酵的菌种应有菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。

5.2.2在发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。

5.2.3菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿级以上。

5.3培养基

5.3.1原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳、氮源营养丰富。

5.3.2二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。

5.3.3发酵培养基在保证菌体生长旺盛，利于芽胞形成的前提下，尽量利用来源充足、价格低廉的原料。

5.4灭菌

5.4.1液体发酵，发酵罐的装液量50%～70%,液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为121℃~125℃,0.1MPa～0.15MPa,灭菌20min～30min。

5.4.2固体物料含水率50%～60%,121℃~130℃,灭菌1.0h～2.0h。

5.4.3灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重复5.3的工作。

5.5接种

摇瓶种子到发酵罐种子接种量为1%～5%,种子罐到发酵罐接种量为5%～7%。接种保证无菌操作，调节进、排气阀，使接种口有气体排出。

5.6发酵

5.6.1芽胞杆菌的发酵温度为25℃~37℃。

5.6.2液体发酵在发酵过程中通入无菌空气，通气量为10m3/h·t～20m3/h-t,搅拌转数80r/min~

150r/min。

5.6.3芽胞率达到80%以上终止发酵。

5.6.4发酵周期24h～48h。

5.6.5发酵过程加入天然油脂类或有机硅类消泡剂，可采用蠕动泵添