DB12T 1006-2020 茄子黄萎病菌土壤带菌 PCR 检测技术规程.pdfVIP

ICS65.020.01

B16

DB12

天津市地方标准

DB12/T1006—2020

茄子黄萎病菌土壤带菌PCR检测技术规程

TechnicalregulationofPCRdetectionforverticilliumdahliaeinsoil

2020-12-17发布2021-01-16实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T1006—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市植物保护研究所。

本标准主要起草人：高苇、王勇、杨利娟、贲海燕、张春祥、刘晓琳、姚玉荣、王万立。

I

DB12/T1006—2020

茄子黄萎病菌土壤带菌PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了茄子黄萎病菌的PCR检测的仪器和试剂、土壤取样、PCR检测、结果判定、土样及资料

保存。

本标准适用于土壤中茄子黄萎病菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修订版）均适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T36197-2018土壤质量土壤采样技术指南

GB/T36199-2018土壤质量土壤采样程序设计指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

茄子黄萎病菌verticilliumwiltofeggplant

茄子黄萎病菌大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaKleb.）可以侵染多种植物引起一种土传的维管

束病害，病菌可在土壤中长期存活，是茄果类作物生产中危害最为严重的土传病害。茄子黄萎病菌的基

本信息参见附录A。

3.2

微菌核verticilliumwiltofeggplant

茄子黄萎病菌生长过程中，一条或多条菌丝体膨大、细胞壁增厚后，多向芽殖而形成的多细胞结构，

该结构为肉眼可见的黑色菌丝颗粒。

3.3

土壤带菌soil-borne

土壤中携带能够诱发侵染植株发病的病原菌。

4仪器和试剂

4.1主要仪器

涡旋振荡仪、高压灭菌锅、高速冷冻离心机、聚合酶链式反应仪（PCR仪）、水浴锅、电子天平（感

量0.1g和0.1mg）、电泳仪、凝胶成像仪。

4.2主要试剂

1

DB12/T1006—2020

水饱和酚、三氯甲烷、液氮、异丙醇、无水乙醇、DNA荧光染料（GelRed）、Tris-HCl等。DNA分

子量标准（DNAMarker，能够区分100bp～1000bp的DNA片段）。

十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）抽提液：2%CTAB，100mmol/LTris·Cl（pH8.0），20mmol/LEDTA

（pH8.0），1.4mol/L氯化钠。

PCR反应混合物：2×MasterMix:Ta