DB12T 1019-2020 猪德尔塔冠状病毒 RT-PCR 检测方法.pdfVIP

ICS65.020.30

B41

DB12

天津市地方标准

DB12/T1019—2020

猪德尔塔冠状病毒RT-PCR检测方法

RT-PCRassayfordetectionofporcinedeltacoronavirus

2020-12-28发布2021-02-01实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T1019—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：李秀丽、鄢明华、郑丽、路超、田向学、张莉、李富强、江珊、任卫科、董志

民。

I

DB12/T1019—2020

猪德尔塔冠状病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪德尔塔冠状病毒（porcinedeltacoronavirus，PDCoV）RT-PCR检测方法的原理、

仪器设备与试剂、样品对照、方法步骤和结果判定等技术内容。

本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中PDCoV核酸的检测。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PDCoV：猪德尔塔冠状病毒（porcinedeltacoronavirus）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscription-polymerasechainreaction）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

cDNA：互补脱氧核糖核酸（complementaryDNA）

PK-15细胞：猪肾细胞（porcinekidneycell）

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）

酶：DNA聚合酶（DNApolymerase）

TaqTaqTaq

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloneymurineleukemiavirus）

PBS：磷酸缓冲液（phosphatebuffersolution）

TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（trisacetate-EDTAbuffer）

3原理

PDCoV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据PDCoVM基因保守基因

序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延伸起点，通过变性、退火和延

伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。依据PCR试验结果，判断样品中是否含有PDCoV。

4主要仪器设备

生物安全柜、组织研磨机、涡旋振荡器、台式低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、

分析天平（精度0.01g）、超低温冰箱（-80℃)等。

5试剂与引物

5.1试剂