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南医微生物实验二ppt课件.pptxVIP

南医微生物实验二ppt课件.pptx

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页脚;实验内容;血清学反应;特异性

可逆性

结合物的可见性与带现象

前带现象:抗体过剩

后带现象:抗原过剩

比例适当:较大的晶格状

免疫复合物;抗原抗体反应的影响因素

浓度与比例

电解质

温度

酸碱度;★血清学反应的种类

1)凝集反应(agglutination)

2)沉淀反应(precipitation)

3)补体结合试验(complementfixationtest,CFT)

4)中和反应(neutralization)

5)免疫标记技术;(二)沉淀反应

概念:可溶性抗原+抗体沉淀物

单向琼脂扩散、火箭电泳:抗原定量试验

抗体琼脂板、抗原扩散(自由、定向)

双向琼脂扩散、对流免疫电泳:抗原分析、

抗原定性试验等

抗原、抗体同时扩散(自由、定向);单向琼脂扩散

单向琼脂扩散试验是一种定量试验。

将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在适当位置打孔,将抗原加入孔中扩散,与板中抗体相遇,在比例合适处呈现白色沉淀环,环的直径与抗原含量成正比。

主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量;单向定量免疫电泳(火箭电泳)

将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在板的一端打一排小孔,加入待检样品,置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,状如火箭,称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。

敏感度与单扩相仿,但需时较短。;双向琼脂扩散

在琼脂板上打孔,抗原和抗体分别加到相应孔中,二者自由向四周扩散,在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统,可出现多条沉淀线。

可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分;对流免疫电泳

打孔:金属打孔器打两排孔,抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。

加样:抗血清加于抗体孔内;待测抗原、阳性、阴性对照抗原分别加于抗原孔内

电泳:将琼脂板置电泳槽,抗原孔置阴极端,抗体孔置阳极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连,通电30分钟。

结果:在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。;(三)补体结合试验;(四)中和反应(neutralization)

病毒中和试验

毒素中和试验;(五)免疫标记技术

将已知抗体或抗原标记显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。

常用的标记物有:酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等;淋巴细胞转化试验

转化百分率正常值为70%左右

分裂相:即染色体型

母细胞:大4-5倍;核质疏松,有1-3个核仁;核周透明区;胞浆有空泡

过渡型:略大;核质略疏松;着色较淡

小淋巴细胞:核质致密;着色深;胞浆少;E玫瑰花环试验

T细胞表面有绵羊红细胞受体,可在自然情况下与绵羊红细胞结合,形成E玫瑰花环,由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。;直接凝集反应——玻片凝集;实验报告

六张图:单扩、火箭电泳、双扩、

对流免疫电泳、淋转、E花环

原理及结果:玻片凝集(结果可用图示)

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