体内药物分析薄层色谱法.ppt

稳定性试验板内误差测定仪器精密度测定回收率试验都很好，但板间误差较大（国产板青岛海洋化工厂）板间差异大，意味着：一次实验用一块板、每块板带有工作曲线点、用进口板、若你的工作单位没钱买HPLC仪，但又要做体内药物分析，你选择哪种方法？（从光谱法、HPTLC法中选一种）我建议用HPTLC。只要浓度不是太低（如环孢素）的药物，可分离测定。如苯妥英钠：有效浓度10-20，用10、15、20标准点与板上，用目测对比法。14、16没有什么本质的差异，但有没有监测却有本质的差异。目的：测定乐果中毒，其血中浓度高,快速在试验设计上有问题！应该1.标准、血样有机溶剂提取后点样（典型做法，但浪费了宝贵的时间）2.标准溶于空白血清后与血样一起点样（与蛋白结合的乐果完全溶于展开剂）3.同论文做法，但必需证明标准溶液与加标样的结果完全相同如果你的单位没钱，又要开展TDM，建议用薄层色谱法样品浓缩*色谱法色谱法是一种物理或物理化学的分离分析方法，其分离原理主要是利用物质在流动相和固定相中的分配系数、或吸附能力等的差异而得到分离。随着临床药学的迅速发展，色谱法在体内药物分析中的应用更为广泛，具有不可取代的重要地位，已成为体内药物分离检测最重要的方法色谱法包括纸色谱、薄层色谱、凝胶色谱、气相色谱和液相色谱液相色谱法是应用最广的分离分析方法，特别是对于复杂样品的分析尤为重要。液相色谱法的分支很多，广义的液相色谱法包括：高效液相色谱法、薄层色谱法、超临界流体色谱法、毛细管电泳法等类别，而它们又各自包括多种方法。第一节薄层色谱法（TLC）*是指将固定相均匀地涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属膜等表面上形成薄层，将被分离物质点在薄层板的一端，置展开室中，展开剂借毛细管作用从薄层点样的一端展开到另一端，在此过程中不同物质可以进行色谱分离。根据不同的分离机制，薄层色谱法可以分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、离子交换薄层色谱和凝胶薄层色谱。可以同时平行分离多个样品；分析成本低；对样品预处理要求低；薄层板一次性使用，对样品要求不高；对固定相、展开剂的选择自由度大。薄层色谱的特点：1传统的TLC法缺点：展开时间长、展开剂体积需求大和分离结果差等。其色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层析环境中展开剂的饱和度、环境温、湿度等因素的影响，有时难于重复；显色易受均匀性、灵敏度、稳定性等影响，这均使测定结果偏差较大。2是近年来迅速发展的一种高效、快速、操作简便、结果准确、灵敏度高和重现性好的薄层色谱新技术，它采用更细、更均匀的改性硅胶和纤维素等为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性，可以实现正相和反相薄层色谱分离，提高了色谱的选择性，已广泛用于各个领域。高效薄层色谱法highperformancethin-layerchromatography(HPTLC)与传统TLC相比，高效薄层色谱法在薄层制备、展开方式、分析鉴定手段以及相配套的仪器设备等方面进行了许多改革，其中最根本的是固定相的改进。而在TLC、HPTLC和UPTLC三种规格的预制硅胶薄层板中，又以HPTLC最能体现出薄层色谱分析效率高且经济实用的特点。其应用在目前的科研和日常分析中越来越得到普及。无定形HPTLC硅胶的平均粒径和粒径分布范围相对TLC有较大改善，以较短的展开距离和时间就可以获得较高的理论塔板数和分离度。由于成分斑点更为集中，因此所需的有效涂层厚度也大为减少，检测灵敏度也因而较TLC有一个数量级的提高。C18：弱极性0101020304Diol:二醇醚改性CN：丙基腈改性NH2：丙氨基改性020304*点样两个基本要求：*点样位置需精确；尤其对于定量分析，点样体积需要精确和准确。为了提高分离效率，原点在展开方向应该尽可能小，对于HPTLC，应小于1.5mm，点状点样：体积受到严格限制。在HPTLC板上点状点样体积通常为0.1-1μL。溶剂在板上扩散会“环形色谱”。非接触喷雾式条带状点样：均匀，可提高解析度和检测限。由于HPTLC扩散小，10*10cm板可点16个样品”薄层色谱有别于其他色谱技术，除了都有固定相和流动相外，还存在气相。气相会对分离结果产生显著影响。展开室预先用展开剂饱和展开距离由于TLC中流动相的速度不是固定的，而是随展开时间和展开距离增加而降低，所以展开距离有一定限制。通常在HPTLC板上5cm展距分辨率较高展开显色剂显色法：喷雾显色，借助喷雾器喷细雾至板面湿润。紫外线照射法：如AFT