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人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程

本品系用狂犬病固定毒（aG）适应株接种原代地鼠肾单层细胞，培养后收获病毒液，加入甲醛溶液灭

活后浓缩，再加氢氧化铝制成。用于预防狂犬病。

1毒种

1.1毒种来源

狂犬病固定毒aG适应株系用狂犬病固定毒北京株先在地鼠肾细胞传代适应后，再通过豚鼠脑内交替

传代适应而成。由中国药品生物制品检定所检定、保存与分发。生产用毒种传代应不超过10aG交替代。

1.2毒种检定

无菌试验

aG毒种每次传代收剖后均须做无菌试验，合格者方可使用。

病毒滴定

aG毒种用体重11～13g小白鼠进行脑内病毒滴定，滴度方可用于生产。

纯毒试验

生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和试验，以鉴定毒种的特异性。所用特异性抗血清由中国药品

生物制品检定所提供。中和指数必须在500以上。生产过程中如对毒种发生疑问，应及时进行鉴定。

1.3毒种传代

选择体重120～160g健康豚鼠，脑内注射，选潜伏期80～100小时具有典型狂犬病症状者放血致死，

无菌取脑。豚鼠脑连续传代不超过5代。

1.4毒种保存

供生产用aG株在-60℃以下保存，不得超过1年。

2疫苗制造

2.1细胞制备

地鼠

选用12～14日龄健康地鼠，如腹腔有充血、渗出液、肾脏异常等应废弃。

解剖

处死地鼠，用消毒液洗涤皮毛数次，末次浸泡一定时间，无菌取肾，置于瓶中剪碎。

细胞消化及分装

将剪碎肾块洗涤数次，加入适量胰蛋白酶消化液，置2～8℃过夜（约16～20小时）或37℃水浴消化

适当时间，弃去消化液，经洗液洗涤2～3次，振摇或吹打分散细胞，加入适量生长液，分装培养瓶，置3

7℃℃培养长成单层。

使用液体

均不得含青霉素或其他β内酰胺类抗生素。

生长液

为含不超过10%小牛血清水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液，可加入适量抗生素。

浸泡液

为水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液，其中保护剂可选用0.1%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。

维持液

为199或其他适宜的溶液，其中保护剂中可选用0.4%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。

外源因子检查

每生产批细胞留5%（或不少于500ml）悬液作为对照细胞检查外源病毒。该细胞除不接种病毒外，细

胞浓度和处理均与生产过程平行进行。至原液收获之日用显微镜观察，应无病变发生。并用0.2%～0.5%豚

鼠红细胞（4℃保存不超过7天）进行血吸附试验，置4～8℃30分钟判定结果；再置20～25℃30分钟再次

判定结果，均应为阴性。如有可疑病变或血吸附可疑阳性，在同种细胞上继续盲传，如传出病毒，该批细

胞制备的疫苗应予废弃。

2.2病毒接种和病毒液收获

病毒接种

将长成单层细胞瓶倾去营养液，换入浸泡液。同时将无菌试验合格的aG株摇碎后，经1000r/min离心

10分钟，吸取上清液按1∶1000～1∶4000种入细胞瓶，也可将细胞与病毒同时接种，置32～37℃继续培

养。

洗换

种毒后吸附适当时间倾去浸泡液，用Hanks液或其他适宜液体洗涤细胞，然后换入维持液，置32～37℃

继续培育。

病毒液收获

洗换后观察细胞生长情况，选择适当天数收获病毒液，取样品做病毒滴定及无菌试验。

病毒滴定

将样品做10倍系列稀释，取3个稀释度的病毒液，每个稀释度用体重11～13g小白鼠4只，每只脑内

接种，逐日观察，14日判定结果，计算LD50（3日内死亡者不计）。滴度要求在以上。可重试1次。

2.3灭活

病毒液内加入1/4000～1/5000的甲醛溶液，置32～37℃或2～8℃或其他适宜温度灭活一定时间。

2.4过滤合并

将无菌试验合格的病毒液用滤球或绢布过滤后合并即为原液。

2.5防腐剂

按0.005%～0.01%加入硫柳汞。

2.6超滤浓缩

原液按其滴度进行不同倍数浓缩。按《生物制品无菌试验规程》进行无菌试验。

3疫苗剂型

3.1液体浓缩疫苗

病毒液灭活经超滤浓缩后再加入Al（OH）3，使最终含量为～。

3.2冻干浓