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EBVLMP2B细胞表位的预测、克隆、表达及其融合蛋白免疫原性的初步研究温州医学院2004级硕士学位论文答辩答辩人：欧琴导师：张丽芳教授夏克栋教授专业：病原生物学2007.5.17
主要内容◆研究背景◆研究目的◆研究方案◆结果◆分析与讨论◆结论
研究背景EB病毒(Epstein-Barrvirua,EBV)属于γ疱疹病毒科。引起的主要疾病包括传染性单核细胞增多症、移植后淋巴细胞增多症(PTLD)、霍奇金病、Burkitt淋巴瘤以及鼻咽癌(NPC)。
研究背景肿瘤亚型EBV阳性率表1EBV相关的增生性疾病Burkitt淋巴瘤E-BL100%S-BL15%-85%AIDS-BL100%NPC低分化或未分化100％霍奇金病mc/ld80%-90%ns30％T细胞淋巴瘤fatalIM100%AILD40%淋巴母细胞瘤fatalIM100%与器官移植相关100％与AIDS相关70％-80%
研究背景LMP2不是转化基因，维持EBV潜伏感染。LMP2成为NPC等EBV相关肿瘤治疗的理想靶抗原之一。
研究背景表位疫苗是目前研制感染性疾病与恶性肿瘤疫苗的方向。多表位疫苗能选择性诱导多价、多特异性应答和控制免疫应答类型。
研究方案一、EBVLMP2的二级结构分析和B细胞表位预测
研究方案采用EXPASY服务器提供的SwissProt蛋白质数据库检索LMP2完整蛋白质的氨基酸序列(/sprot/);采用EXPASY服务器提供的SOPMA、GOR、nnPredict、HNN方法预测LMP2二级结构(http://www.expasy.ch/tools)；采用EXPASY服务器提供的SOSUI方法预测LMP2跨膜区域(http://www.expasy.ch/tools)；采用EXPASY服务器提供的HoppWoods、Emini、Jameson-Wolf、Zimmerman方法预测LMP2的亲水性、表面可及性、抗原性、极性及柔韧性参数(/cgi-bin/protscale.pl)；对上述方法预测的结果进行综合分析，推断LMP2的B细胞表位，并用吴玉章等建立的抗原性指数(AI)综合评判EBVLMP2的B细胞优势表位。◆◆◆◆◆
研究方案二、EBVLMP2B细胞表位的克隆、表达及其融合蛋白的纯化
研究方案引物设计与合成退火获得目的基因pET32a(+)/EBV-LMP2B细胞表位重组质粒的构建纯化、连接、转化DH5α大肠杆菌转化BL21大肠杆菌，诱导、表达、纯化表位融合蛋白SDS、Westernblot分析pET32a(+)质粒酶切酶切、测序鉴定
研
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